稻瘟病菌致病突变株的分离

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1、维普资讯http://www.cqvip.com⑦f?卜f?7第15卷第3期Journa1ofY云ur南ma农n业Ag大ri学cul学tu报ra1University．15No．3200(1年9月Sep2000稻瘟病菌致病突变株的分离‘；5l『『『．teHn口，Hv／何月秋唐文华Hei1unRobertS．Zeiglerz——(1中国农业大学植物病理系．北京100094)【2国际水稻研究所昆虫植病系，雅律寓卡提3127)摘要：利用4个分耩宗求群4，7，17和44的卤株连续接种0039的荩因近等袋圜系和基因累加系卜以获得突变抗病菜困新菌株：雏13轮接种循环，共分离刮9个新菌

2、株其中8个针对CIO1[AC(Pi1)突变、男1个针对a01PK1’(I]i4a)和F128(I]i)的双位点突变4个原始菌株．P066，92486，92394和10172的突变频率分别为：0，2．82×10’，2．05×10和909×10菌株针对同抗病基因的突变额牢同．由Av1变到Av1’和由Avir4a(t)突变到Av4a的频率分别为7．51×10和614×105o没有针对2突变体出现。咄关键词：墅塑；：釜：；建羔苎里至中国分类号：,9435．111．4。1文献标识码：A文章编号：1004390X(2000J03019703尽管人们经历了近一个世纪的防稻瘟病研究，层尼

3、龙纱网过滤而获得。但该病仍然是水稻最严重的病害。尤其是一个抗1．2品种和秧苗管理病品种常常在推广不到几年时间由于病菌群体组用于寻找突变菌株的品种(表1)均具有C039成变化便成为感病品种1J而在生产上更具重要遗传背景J，它们为(3039，3个(3039的近等基因性。病菌致病力是否稳定不仅是个科学问题而且系(NIb)，4个近等基因累加系：BL121，BL141，是个应用问题，因而关f病菌致病力稳定性在学术BI上41和A57119(国际水稻所黄宁博十提供)。界长期争论不休_1～，但争论的焦点是变异额率高供试用于确认突变菌株的品种，除了前述的品种低。本文通过反复在近等基因系上接

4、种来分析稻外，还包括C1O4PKT(携带3的0039另一个瘟病菌针对上效基因的突变频率。近等基因系)，丽江新团黑谷(ITH)，6个丽江新团黑谷的近等基因系J。lO～12粒种子直播干直1材料和方法径为10cm的塑料杯里，重复2次，随机排列。秧L1菌株和接种苗长两周(3．5-4．0叶)，进行喷雾接种。接种用于温室接种的4个原始菌株196—6，9248后秧苗立即置于25℃结露室保湿18-24h，然后—6，92394和10172列于表1。菌株的培养转25℃的温室里保温5d。于第6d按0～5级按前报方法]进行。接种前将4个菌株两两配对标准[逐株调查病虹数和病斑型。等量混合以求不同致

5、病型菌株在植株体内有机会1．3突变菌株的分离和证实产生准性重组，以单一菌株作为对照，第一轮接从感病品种上剪下病斑用于下一轮接种，从种的孢子来源于培养基，以后各轮接种体主要直抗病品种上剪下感病型病斑用于单孢分离。将新接来源于病斑。这些接种体是在调查病情后，将分离的菌株再接种到C039近等基因系和累加系罹病的植株置于25℃恒温的结露室中保湿24h，上2或3次，以证实致病力变化。剪下病斑加入适量的无菌水振荡洗脱．然后经两1．4菌丝培养和DNA提取，同何月秋等【。收稿日期：2000o418蕞金项目：南省教委和南省科委资助项目(98CL~35M)作者简介：何月秋(1956)另，湖北

6、试，c市人．博士，剐教授，主要从事分生物学研究。维普资讯http://www.cqvip.com198云南农业大学学报第15卷1．5PCR分离菌株的分子指纹，排除污染和确认亲子关系。以引物Pot21和Pot22对所有新获得的PCR扩增和产物的电泳分离条件参照文献。菌株和原始菌株都为进行PCR扩增，以便检查新表l亲本菌株和突变菌株的致病类型Fab1Pa1h。鲫lcly／：~S1bepar1la，andmulantisolates注：*P1，P2，P3和P4分别为亲奉菌株P066(宗求群1．4)．92486(I．7)．92394(i17)和1017—211(1)F2，F3和H

7、是突变体，括号中的数字为菌株数。1．6突变频率的估计品种上类似感病型的病斑。这样共获得120个这突变频率估计以在感病品种(3039上产生的种病斑和120个新菌株，通过回接证实，仅2(】个病斑数为参数。估计公式如下：能成功侵染来源品种。Mf=∑∑Pd．ij／n∑SIA120个菌株的PCR指纹分析的结果表明，118Mf为突变频率(Mutationfrequency)，RL是个菌株与接种用的原始菌株相同，2个菌株改变抗病品种上产生的感病型病斑数，SL是接种到感了指纹型(资料未列出)。能侵染来源品种的20个病对照品种(3039上的病斑