用t—dna插入突变的方法获得稻瘟病菌致病突变体

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1、万方数据浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensis20(6)：391～395，2008用T—DNA插入突变的方法获得稻瘟病菌致病突变体李亚1，孔慧敏1，梁慎1，方敏彦2，阎霞1，王政逸1，。(1浙江大学农业与生物技术学院。生物技术研究所，浙江杭州310029；2甘肃农业大学草业学院，甘肃兰州730070)摘要：利用农杆菌介导转化的方法共得到1114个稻瘟病菌转化子，经感病大麦和水稻离体叶片接种鉴定获得3个致病缺陷或下降突变体：AI．134、A1．452、和A2．1．8，其中AI一134和A1-452的致病性下降，而A2．1．8突变体的致病性丧失。对这些突变

2、体的分牛孢子形态、产孢、附着胞形成等表犁分析的结果发现，A1．134突变体的产孢量显著下降，仅为野生菌株Guyll的7．7％，分牛孢子为圆球形，无隔膜或只有一个隔膜；AI一452产孢量明显增多，为Guyll的22倍；A2．1．8的分生孢子为长针形，产孢量略有下降；A1．134和A1-452在疏水表面的附着胞形成率与Guyl1相近，而A2．1．8则不能形成附着胞。研究结果为进一步鉴定和分离这些突变体的T-DNA标记基凶奠定了基础。关键词：稻瘟病菌；根癌农杆菌介导转化；T-DNA插入突变；致病突变体中图分类号：$432．I；Q343．1+5文献标识码：A文章编号：1004—1524(20

3、08)06—0391—05IdentificationofpathogenicitymutantsofMagnaporthegriseabyT-DNAinsertionalmutagenesisUYal，KONGHui．minl，LIANGShenl，FANGMin—yan2，YANXial，WANGZheng-yil'。(1BiotechnologyInstitute，Collegeof4卯b妇鹏andBiotechnology，ZhejiangUniversity，觑I，劝DⅡ310029，PRChi—na；2CollegeofGrasslandScience，C-al峦uAgr

4、icullu．reUniversity，Lanzhou730070，China)Abstract：1114transfonnantsofMagnaporthegmeawereobtainedusingAgrobacteriumtumefaciens—mediatedtransforma-tion．Threepathogenicitymutants，AI一134，A1—452andA2一l·8，Wel-eidentifiedbysusceptiblebarleyandricecut-leafas-say．PathogenicityofA1-134andAI一452wasreduced，

5、andA2—1-8wasnonpathogenictobothbarleyandrice．PhenotypieanalysisofthesemutantsshowedthattheAI一134producedsphericalconidiawithoneseptumornoneatallandeonidiationWassignificantlyreduced．only7．7％conidiacomparedtothewildtypeswain；A2—1—8producedlong-shapedeonidiaandwasslightlyreducedinconidiation．Inad

6、dition．AI-452was22一foldincne{Isedineonidiationoverthewildtypestrain．More-over，A2-1—8wasunabletoformappressofiaonhydrophobicsurface，whilethepercentageofappressoriumformationofAI一134andAI-452wassimilartothewildtypestrain．Allthesemu'tantswereusefUforfuitherisolationandidentificationofT-DNAtaggingg

7、enesinvolvedinpathogenicity．Keywords：Magnaporthegrisea；Agrobacteriumtumefaciens—mediatedWansformation；insertionalmutagenesis；muPant稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)侵染水稻引起的稻瘟病是水稻最为重要的病害之一。对全世收稿日期：2008—05—17基金项目：周家自然科学基金资助项目(30570054；30670073