云南省玉米大斑病菌的rapd分析

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1、云南大学学报(自然科学版)，2011，33(2):244～248CN53－1045/NISSN0258－7971JournalofYunnanUniversityhttp://www．yndxxb．ynu．edu．cn*云南省玉米大斑病菌的RAPD分析1，2211，2王利智，吴景芝，康志钰，何月秋(1．云南农业大学农学与生物技术学院，云南昆明650201;2．云南农业大学教育部农业生物多样性与病虫害控制重点实验室，云南昆明650201)摘要:应用7条随机引物对采自云南省不同玉米产区的玉米大斑菌81个菌株的DNA进行了RAPD分析．结果表明，这些菌株共产生60条谱带，

2、其中43条为多态性带，占71．7%．利用UPGMA法对DNA扩增图谱进行聚类分析，以遗传距离0．50为阈值，81个菌株可分为5个遗传群体，表明云南省玉米大斑病菌中具有丰富的种内遗传多样性．然而，这种分子标记所划分的群体与菌株来源地及致病类型间没有直接关系．关键词:玉米大斑病菌;RAPD;遗传多态性;云南省中图分类号:S435．131文献标识码:A文章编号:0258－7971(2011)02－0244－05大斑突脐孢菌［Exserohilumturcicum(Pass．)定和分析云南省不同玉米主产区的大斑病菌遗传LeonardetSuggs］引起的玉米大斑病广泛分布在

3、世多样性，旨在为大斑病防治提供参考．界玉米产区，是危害较重的叶部病害之一．我国于1材料与方法［1］1899年首次在东北发现玉米大斑病．20世纪70年代以来，该病曾在我国西南冷凉地区、河北及东1．1供试菌株从云南省不同玉米主产区采集玉北春玉米种植区几度发生和流行，一般年份减产米大斑病病叶，经组织分离、单孢纯化获得81株玉［2］20%，严重时达50%．近年来，玉米大斑病发生米大斑病菌菌株(下称大斑菌株)(表1)．菌株的呈回升趋势．2003年和2004年，北方春玉米区和生理小种鉴定见文献［11］．［12］西南玉米区的大斑病大范围严重发生，且许多品种1．2病菌DNA提取采用

4、HEY．(何月秋)上的病斑类型发生了变化，病斑长度常常达到30修改过的CTAB法提取病菌DNA．～40cm，给玉米生产造成了严重影响．云南省玉米1．3引物筛选经反复筛选，获得扩增产物带型大斑病发生就较为普遍，在部分甜质和糯质玉米上清晰，重复性好的7条随机引物(上海生物工程有发生相当严重，个别品种在抽穗前便开始死亡．然限公司合成)用于81个菌株的RAPD扩增．而，大斑病回升的具体原因目前尚不十分清楚，这1．4RAPD扩增采用25μL反应体系，包含:10可能与长期推广具有抗性基因品种所引起的病原×PCRbuffer2．5μL;2．5mmol/LdNTP1．5μL;10［

5、3］菌生理小种变化有关．μmol/L随机引物1μL;5U/μLTaq酶0．25μL;模随机扩增多态性DNA(Randomamplifiedpoly-板DNA1μL;双蒸水18．75μL．反应循环参数为:morphicDNA，简称RAPD)的分子标记技术，具有94℃预变性10min;扩增94℃20s，37℃退火30简便、灵敏、多态性较好等特点，被广泛应用于生物s，72℃延伸80s，共42个循环;最后72℃延伸10多样性检测，已应用于真菌种间亲缘关系、种内不min．程序结束后取出扩增产物在1．5%的琼脂糖+同来源群体遗传多样性和生理小种鉴别等研凝胶中电泳，Marker为

6、D2000，电泳缓冲液为1×［4－10］究．本研究采用RAPD技术，从分子水平上测TAE，电压4V/cm．电泳结束后，在IQuantcapture*收稿日期:2010－10－15基金项目:云南省支撑计划项目资助(2006NG19);云南省行业体系项目资助．作者简介:王利智(1984－)，男，湖北人，硕士生，主要从事种子病理方面的研究．通讯作者:何月秋(1956－)，男，湖北人，教授，主要从事植物病理学方面的研究，E－mail:ynfh2007@163．com．第2期王利智等:云南省玉米大斑病菌的RAPD分析245紫外凝胶成像系统上观察，保存图像．表12007～200

7、9年云南省81株玉米大斑病菌采集地点Tab．1Eighty－oneExserohilumturcicumisolatescollectedfromYunnanProvinceduring2007to2009菌号来源地小种菌号来源地小种1临沧市临翔区凤翔街道南信桥23N42保山市隆阳区瓦马乡岩脚岩箐村23N2临沧市临翔区南美乡南美村043保山市隆阳区辛街乡大官市村23凤庆县凤山镇后山12N44施甸水长乡小官市村2N4南涧县碧溪乡回龙山村123N45德宏州农科所123N5南涧县南涧镇太平村046德宏州农科所123N6永平县博南镇胜泉村047瑞丽市勐卯镇勐嘎村27大理