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《海南和两广地区柱花草炭疽菌遗传多态性的RAPD分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、植物学通报ChineseBulletinofBotany2007,24(2):173-180,www.chinbullbotany.com.实验简报.海南和两广地区柱花草炭疽菌遗传多态性的RAPD分析1123,4*史学群,宋海超,张欣,易克贤12海南大学生命科学与农学院,海口570228;中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,儋州57173734中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口571101;中国热带农业科学院南亚热带作物研究所,湛江524091摘要利用8个随机引物对来自海南、
2、广东和广西的114个柱花草胶孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)的菌株进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,扩增谱带大小0.2-3.0kb。8个随机引物中以CW38114扩增的谱带重现性和稳定性最好,共扩增出786条谱带,其中多态性谱带558条。供试菌株扩增图谱在260-650bp处有3条明显的共同特征谱带,在650-3000bp之间的谱带显示较大的多态性差异。聚类结果表明:供试菌株主要分为四大遗传类型,其中第I类和第III类有两个亚类;三省区的菌株遗传多态性
3、丰富程度依次为海南>广西>广东,并表现出地区性分布差异。研究结果还表明柱花草炭疽菌株表现出一定程度的专化寄生性。关键词胶孢炭疽菌,随机扩增多态性DNA,柱花草史学群,宋海超,张欣,易克贤(2007).海南和两广地区柱花草炭疽菌遗传多态性的RAPD分析.植物学通报24,173-180.柱花草(Stylosanthesspp.)又名笔花豆1962年我国开始从马来西亚系统引入柱花草。据(penciflower),是全球热带地区栽培面积最大、应用最冯淑芬(1994)在1987-1989年对海南、广东和广西3
4、广泛的优良豆科牧草,除广泛用作牧草供放牧和生产优省区11个市县的主要柱花草种植区的调查结果显示,各质干草及草粉外,还可作为绿肥和幼龄胶园、果园的覆地均有炭疽病分布。此后,易克贤等(2001,2003)对我盖作物以及水土保持植物。国广东、广西和海南3省的14个主要柱花草生产市县柱花草炭疽病(styloanthracnose)是目前严重影响再次进行了调查,发现我国柱花草同时存在A、B两种柱花草生产和推广的主要病害,在全球柱花草种植区均专化型,而在我国危害较大的是B型胶孢炭疽菌。有分布。该病主要由半知菌亚
5、门刺盘孢属的胶孢炭疽由于不同柱花草胶孢炭疽菌株菌丝体和分生孢子表菌(Colletotrichumgloeosporioides)引起。柱花草炭疽型培养特征高度相近,因此利用传统的形态标记和经典病主要危害植株叶、茎并具有再侵染特性,使牧草叶片遗传标记很难对其进行分类鉴定。而分子标记技术的变黄、坏死并脱落,茎、叶柄和顶芽枯萎,花序败落产生和发展为从基因组DNA分子水平上进行柱花草炭不结籽,严重时能使幼苗和整个成株死亡,造成牧草产疽病原菌株的遗传分析提供了便捷的手段。特别是量和种子产量锐减,甚至绝收。研究
6、表明,柱花草炭疽RAPD技术,由于其简单易行,成本低,分析大量样本速菌具有丰富的生物多样性和遗传变异性,许多抗病品种度快,近年在研究植物病原真菌的群体遗传特别是种内使用几年之后便丧失原有抗性。国内外生产实践证明,遗传分化上,显示了独特的优越性而得到广泛应用一个抗病的柱花草品种使用10年后就会变成感病品种,(Munautetal.,1998;陈亮等,2000;易克贤等,2003;即品种寿命一般只有10年左右。因此深入进行柱花草桂秀梅等,2005;郭宏波等,2005)。炭疽病病原生物学和遗传学研究,加速
7、培育柱花草抗炭本研究是在易克贤等(2003)对少量中国柱花草炭疽疽病品种已成为柱花草主要生产国的一项紧迫任务。病原菌株基因组DNA进行RAPD分析的基础上,通过在收稿日期:2006-06-21;接受日期:2006-11-20基金项目:国家自然科学基金(No.30160059)、海南省自然科学基金(No.3005)和热带作物生物技术国家重点实验室开放研究基金*通讯作者。E-mail:yikexian@21cn.com174植物学通报24(2)2007海南、广东和广西3地更大范围和数量上收集柱花草炭醇洗
8、涤2次,超净工作台吹干。溶于100mL双蒸疽病原菌株,进行DNA多态性分析,以进一步确定我国水-20°C保存。用紫外分光光度计调模板浓度为-1柱花草主要生产区(海南、广东和广西)的柱花草炭疽菌25ng·µL。的遗传多态性和病原遗传分化类型,为我国柱花草抗炭疽病育种工作中育种目标的制定、抗病材料的鉴定筛1.2.2PCR扩增选、抗病品种的培育、致病的分子机理和病害预测及参考易克贤等(2003)的方法,用8个含有10个碱基的随防治等提供科学依据。机寡聚核苷酸(表2)作为引物
