中国柱花草炭疽病原菌遗传多态性rapd分析

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1、!"卷"期微生物学报&’()!".’)"#$$"年%月!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$*+,-#$$"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!中国柱花草炭疽病原菌遗传多态性的!"#$分析2#2""易克贤黄俊生刘国道B+9(=,-C--DE4+?+<9F3G9F?F9H’FI>（2中国热带农业科学院热带牧草研究中心儋州0J2J"J）（#中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室海口0J22$2）（"34KLM6F’N=A9(OPF=A+(I+F-，4IQ+A=9，R+--,E9(9,D，O

2、+EIF9(=9）摘要：在对中国柱花草炭疽病进行广泛调查和病原采样收集的基础上，利用LOBS分子标记技术对!"个代表性菌株进行了基因组S.O分析，并与#J%份国外菌株进行了综合聚类分析。结果表明所用7个引物的扩增片段位于$T"U#T7?H之间，菌株间呈现显著的S.O多态性。以柱花草起源中心———南美的柱花草炭疽菌分类为基础，中国柱花草炭疽菌可划分成"大类型即!、"、#类。中国菌株与来自柱花草起源中心———南美的菌株相比之下，其生物多样性和遗传变异性则相对简单。就中国菌株而言海南菌株与广西、广东菌株相比多样性较丰富，中国柱花草胶孢炭疽菌正在出现种内遗传分化。从聚类结果看，通

3、常来自于同一个地理区域或同一个寄主基因型的菌株聚成一类，即同一LOBS聚类组内的菌株通常来自于同一寄主基因型或同一地理区域。说明来自不同寄主基因型或物种的炭疽菌在遗传基因上具有专化性，而地理上隔离的国家或地区的柱花草炭疽病原菌各自具有相对独立的进化途径。关键词：柱花草，胶孢炭疽菌，随机扩增多态性S.O分析中图分类号：R/"7文献标识码：O文章编号：2$$%1%2J/（#$$"）$"1$"J/1$/柱花草（!"#$%&’(")*&ENN)）又名笔花豆（B-,A=V(’W-F），是全球热带地区栽培面积最大应用最广泛的优良豆科牧草，除广泛用作牧草供放牧和生产优质干草及草粉外，还

4、被用作绿肥和幼龄胶园、果园的覆盖作物及水土保持植物。柱花草炭疽病（4I>(’9,IGF9A,’E-）是目前严重影响柱花草生产和推广的主要病害。该病主要由半知菌亚门刺盘孢属的胶孢炭疽菌［+%$$*"%",-.)/01$%*%&2%,-%-3*&（B-,X)）B-,X)O,D49AA)，在澳大利亚和美洲偶尔也称之为4$%0*,*$$’.-(1/$’"’（4I’,-<)）4N’9+(D)O,D4AGF-,?］引起。柱花草炭疽病可造成牧草叶片变黄、坏死脱落，茎和叶柄枯萎，花序败落不结籽，严重时使幼苗和整个成株死亡，牧草产量和种子产量锐减，甚至绝收。在柱花草炭疽病原菌的遗传研究上，

5、根据发病症状、病原菌的寄主范围、病原菌离体［2］培养和遗传特征，现已发现胶孢炭疽菌有两种专化型：O型菌侵染所有种的柱花草，而Y型菌主要侵染圭亚那柱花草。通过采用鉴别寄主进行致病力鉴定、并结合同功酶、核型分析（;Z）、L8QB等方法进行分析，目前在澳大利亚已有!个O型菌小种和!个Y型菌小［#U!］种被鉴别出来。利用这一成果，澳大利亚通过人工杂交和抗病筛选育成了一个抗小基金项目：农业部“九五”重点课题（/01牧1$#1$#12!）；中澳科技合作项目（3425/052#/）；海南省自然科学基金项目（"$$0）作者简介：易克贤（2/%!1），男，副研究员，硕士，主要研究方向为牧草

6、抗病遗传育种研究。6-(：7%17/71#""$$%!0；89:：7%17/71#""$$!!$；;1<9=(：>=?-:=9,@#2A,)A’<收稿日期：#$$#1$/12"，修回日期：#$$#12#1#"参加项目室外病原采集的还有韦家少、何华玄等同志，特此致谢。#-0微生物学报$#卷种!，"，#，$的粗糙柱花草高抗品种%&’()。［,］［+］我国!*+"年从马亚西亚引入柱花草。据冯淑芬等人!*-./!*-*年对广东、海南两省!!个市县的主要柱花草种植区调查，均有炭疽病分布，其中格拉姆病情指数为"0/［.］!00，库克病情指数为$0/!00。此后易克贤等人!**.年对我

7、国广东、广西、海南#省的!$个主要柱花草生产市县再次进行了调查，发现我国柱花草亦同时存在1、2两种专化型。由于我国目前推广种植的柱花草主要是圭亚那种，因此危害我国柱花草的主要是2型胶孢炭疽菌，但其致病小种类型尚不清楚。因此本文在对中国柱花草炭疽病害进行广泛调查和病原采样收集的基础上，利用3145分子标记技术对中国柱花草胶胞炭疽菌株进行基因组561分析，并与国外炭疽病原菌进行综合聚类分析，以确定中国柱花草胶胞炭疽菌的遗传多态性和病原遗传类型，为柱花草炭疽病抗病育种和病害预测及防治提供科学依据。!材料和方法!"!病原菌材料!**.