胰岛素样生长因子1基因在退变椎间盘中的表达及其对蛋白多糖、ⅱ型胶原的影响

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1、万方数据坚垡塞堕处挝苤圭!!!!至；旦筮堑鲞筮!塑g!也』垦!￡!!强：!!!型!翌!螋!：y!!：堑：№：兰胰岛素样生长因子一1基因在退变椎间盘中的表达及其对蛋白多糖、Ⅱ型胶原的影响黄宗强郑召民王卫东刘宏建【摘要】目的观察人胰岛素样生长因子(hIGF)-1基因在退变椎间盘中的表达及对椎间盘聋白多糖、Ⅱ型胶原的影响。方法制备新西兰大白兔腰椎间盘退变(IVDD)模型24只，随机分为Ad／CMV-hIGF一1、hIGF，1生长因子及磷酸盐缓冲液(PBS)组，每组8只。k一，、k．。椎问盘中分别注射第2代Ad／CMV-hIGF一

2、1(8×108PFU)、hIGF一1生长因子(100斗g／L)、PBS25斗l。注射后1⋯248周，Westernblot检测椎间盘中hIGF．I蛋白表达；半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测蛋白多糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果hlGF．1蛋白带出现在7．6×103道尔顿。Ad／CMV—hlGF一1组hIGF-1蛋白表达持续达4周以上，hIGF．1组表达持续约2周；PBS注射组无hlGF-1蛋白表达。ag-grecan电泳条带出现在200～300bp；在注射后1—4周，Ad／CMV·hlGF一1组内aggrec

3、snmRNA相对表达量进行性增加，8周轻度下降，4个时期总的比较(F=8．51，P<0．05)；注射后1～8周，hlGF—l注射组、PBS注射组aggreeanmRNA相对表达量进行性下降。三组中Ⅱ型胶原的相对表达量呈现aggrecanmRNA类似趋势。结论hIGF．1基因能够在退变椎间盘中的表达；对椎间盘蛋白多糖、Ⅱ型胶原的影响存在时效依赖性。【关键词】椎间盘；退变；胰岛素样生长因子一1基因ExpressionofhIGF-1geneinthedegenerativeintervertebraldiskanditseff

4、ectsonaggrecanandcollagentypeⅡexpressioninintervertebraldiskHUANGz0昭一qiang+，ZHENGZhao—min，WANGWei一如增，eta1．+DepartmentofOrthopaedics，theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUnive倦ity，Zheng-zhou450052，ChinaCorrespondingauthor：WANGWei一如增【Abstract】ObjectiveTostudyhIGF一1g

5、eneexpressioninthedegenerativeintervertebraldisk(IVDD)anditseffectonaggrecanandcollagentypelIexpressioninintervertebratdisk．MethodsIVDDmodelsin24maleNew。ZealandrabbitswereestablishedandrandomlydividedintoAd／CMV．hiGF．1。hIGF．1growthfactor．andPBSgroups．Twenty，fivemic

6、rolitresecondgenerationAd／CMV．hlGF—I(T=80×10’PFU／L)，hIGF—Igrowthfactor(100t心o／L)andPBSwererespectivelyinjectedintoL4_5，L5-6intervertebraldisksundertheguidanceoffluoroscope．One，2，4and8weekspost—operation，rabbitsweresacrificed，andin—tervertebraldisksampleswereharves

7、ted．Totalproteinsofequalmassintervertebraldiskswereextracted，iso—latedinSDS—polyacrylamidegelelectmphoresis(SDS—PAGE)，andtransferredtopolyvinylidenedifluoride(PVDF)Millipore．ThehIGF—IgrowthfactorexpressionwaSdetectedbyWesternblot．Aggreean，andcolla-gentypeIIgenefra

8、gmentswereamplifiedwithRT-PCR，andrelativeexpressionwasdetectedwithGAPDHasintemalcontr01．ResultsThehiGF．Iinterestproteinexistedat7．6kilo—DMton．Atoneweeka