乙酰肝素酶、mmp2和timp2蛋白在恶性黑素瘤中的表达及意义

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1、郑州硕士学论文题目：作者姓名：学科门类：专业名称：导师姓名、职称：授予单位代码!Q笪窆学号或申请号—0531—2240密级金珏大学位论文乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白在恶性黑素瘤中的表达及意义陈建立医学皮肤病与性病学于建斌教授二零零七年五月十五日郑州大学2007届硕士学位论文中文摘要乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白在恶性黑素瘤中的表达及意义硕士研究生陈建立导师于建斌郑州大学第一附属医院皮肤病与性病科郑州450052摘要恶性黑素瘤(malignantmelanoma,MM)简称恶黑，是一种高度恶性的肿瘤，常原发于

2、皮肤及粘膜组织，可广泛浸润皮肤表皮至皮下组织或粘膜及粘膜深层组织，甚至相邻器官(或组织)，并可通过淋巴结、血行远处转移，或广泛搔散，发病率占皮肤恶性肿瘤的第三位(3％～5％)，死亡率极高，其浸润、转移又是引起恶性黑素瘤患者死亡的主要原因，因此，对恶性黑素瘤浸润、转移机制的探讨已成为研究热点之一．癌细胞一个最基本的特点一浸润转移，而在此过程中必需突破由细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)和基底膜(basementmembrane．BM)组成的屏障。该屏障主要由2种成分构成：(1)结构蛋白：包括胶原、

3、层联蛋白、纤维结合蛋白和玻璃体结合素等；(2)糖氨聚糖：其主要成分是硫酸乙酰肝素蛋白多糖(hq)arinsulfateproteoglycans．HSPGs)。在过去的10多年中认为，结构蛋白的破坏是癌细胞侵袭、转移的关键步骤，研究大多集中在底物为结构蛋白的基质金属蛋自酶(matr．Ⅸmetalloproteinase,MMP)，丝氨酸蛋白酶以及半胱氨酸蛋白酶上。现在认为，糖氨聚糖作为细胞外基质和基底膜的另一主要成分也可以封闭、阻滞癌细胞的移动，其降解也是细胞侵袭前所必须的。乙酰肝素酶rheparanase．Hpa)是新

4、近克隆成功的酶，裂解连接于HSPGs核心分子上硫酸肝素的一类内切糖苷酶，是抗肿瘤的理想靶点【l】。目前Hpa、MMP2(matrixmetaUoproteinase-2)和T1MP2(tissueinhibitorofmatrixmetalloproteinase-2)单独或联合其他指标在皮肤恶性黑素瘤(cutaneousmalignantmelanoma,CMM)中的研究已有报道，但三者联合在CMM中郑州犬学2007届硕士学位论文中文摘要表达的研究尚未见报道，MMP2雨tlTIMP2在乙酰肝素酶反义寡核苷酸(hepar

5、anaseanfisenseoligodeoxynucleotide,Hpa-ASODN)转染的裸鼠恶性黑素瘤移植瘤组织中表达的研究未见报道。为进一步探讨Hpa、MMP2和TIMP2蛋白的表达与恶性黑素瘤浸润、转移的关系；寻求早期检测恶性黑素瘤浸润、转移的指标及寻找抑制恶性黑素瘤浸润、转移的有效方法，本文采用免疫组织化学sP技术检测了30例CMM、30例黑素细胞痣及15例正常皮肤组织中Hpa、MMP2和TIMP2蛋白的表达情况；用Hpa-ASODN分组转染培养的A375细胞。分组注入裸鼠皮下，在裸鼠体内构建恶性黑素瘤移植

6、癯动物模型，采用免疫组织化学sP技术检测裸鼠恶性黑素瘤移植瘤组织中与Hpafll／用相关的MMP2和咖2蛋白的表达情况。通过以上实验。试图阐明Hpa、MMP2和TIMP2蛋白的表达在恶性黑素瘤浸润、转移中的意义；Hpa-ASODN对MMP2和TIMP2的抑制作用。为进一步探讨恶性黑素瘤浸润、转移机制及其阻断治疗提供理论依据．第一部分乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白在皮肤恶性黑素瘤、黑素细胞痣及正常皮肤组织中表达的研究材料与方法1．采用免疫组化sP技术对30例CMM组织、30例黑素细胞痣组织和15例正常皮肤组织中的Hp

7、a、MMP2和TIMP2的蛋白表达进行检测．2．统计学处理：所有数据均经SPSSl0．0软件进行统计分析。计数资料计算阳性率；阳性率之间的比较采用f检验(chi．square)；检验水准a=0．05。结果‘1．Hpa的表达Hpa在CMM组、黑素细胞痣组及正常皮肤组中的阳性表达率分别为63．33％(19例／30例)、6．67％(2例130例)和0(O例／15例)，CMM组与黑紊细胞痣组Hpa的阳性表达率比较有统计学意义(92=21．172，P=-0．000)；CMM组与正常皮肤组Hpa的阳性表达率比较有统计学意义(f=27

8、．805，辟0．000)。黑素细胞痣组Hpa与正常皮肤组Hpa的阳性表达率比较无统计学意义。2．MMP2的表达MMP2在CMM组、黑素细胞痣组及正常皮肤组中的阳性表达率分别为70．00％lI郑州大学2007届硕士学位论文中文摘要(21例／30例)、13．33％(4例，30例)和0(0例／15例)，CMM组与黑素细胞痣