htgfβ1基因辅助组织工程修复腰椎间盘退变实验研究

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1、上海第二医科大学博士学位论文hTGF-β1基因辅助组织工程修复腰椎间盘退变实验研究姓名：李旭申请学位级别：博士专业：外科学（骨科）指导教师：侯筱魁20050401上海第二医斜土学gOOg绞博士研宪生学位论文hTGF一131基因辅助组织工程修复腰椎间盘退竞实验研究英文缩写一览表TGF-[，(Transfomfinggrowthfactor-beta)转化生长因子-betaBMSC(BonemesenchymaIstemcell)骨髓间充质干细胞IDDfIntervertebraldiscdegeneration)椎间盘退变Ad／hTGF-B1

2、(AdenovirusmediatedhumanTransforminggrowthfactor-beta1gene)人TGF-B1基因重组腺病毒Ad／llgal(LacZ)(Adenovirusmediated13-galactosidasegene)B．半乳糖苷酶基因重组腺病毒MOIfMultipliesofinfection)感染倍率PBS(Phosphatebuffersatt1磷酸盐缓冲液DMEM(Dulbeeco’smodifiedEa91emedium)Dulbecco的改良Eagle培养基FIBS伍etalbovineser

3、um)胎牛血清SDS(sodiumdodecylsulfate)十二烷基硫酸钠SDS-PAGErSDS-polyacrylamidegelelectrophoresis)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳ECM(ExtraceUularMatrix)细胞外基质ELISA(enzymelinkedimmmmsorbentassay)酶联免疫吸附测定CPE(Cytopathiceffect)细胞病变效应IHC(tmrntmohistochemistry)免疫组织化学RT-PCR(reversetranscription-polymerizationch

4、ainreaction)逆转录聚合酶链反应HA(hyaluronicacim透明质酸GAG(Glycosaminoglycan)糖胺多糖IDD(Intervertebraldiscdegeneration)椎间盘退变NP(NucleusDulpclsus)髓核DDD(Degenel"ativediscdisease)椎间盘退变性疾病学位论支独创性声明Y759876本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已§至发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡

5、献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。作者签名日期：旦苎：苎：么学位论文使用授权声明本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学学位论文作者签名：El期：鲢：点：Z／后适用本规定：‘⋯名巧事妒日期：!￡：!：：Z上海第二医斜大学goog缀博士研竞t学位论文中文摘要研究背景：椎间盘退变性疾

6、病(DDD)已成为超过70％人群中的一种非常常见的疾病。椎间盘退变及其相关疾病如下腰痛等可以导致机体长期致残并降低生活质量。传统的DDD治疗措施包括后路突出椎问盘摘除，经皮髓核切除及受累节段融合等，其均可短期内缓解疼痛但并不能够恢复椎间盘正常的生理和力学性能。与关节腔的软骨组织类似，稚间盘局部的低氧张力、贫乏的血供和酸性环境使得发生退变后其自身的修复能力低下。最近的研究也集中于使用组织工程技术来进行椎闫盘组织的再生。已知目前有许多研究致力于以自体椎间盘细胞及各种生物材料如藻酸盐、琼脂糖、胶原和PGA等，构建组织工程化的椎间盘组织。也有极少的

7、研究报道了使用自体的软骨细胞和骨髓间充质干细胞(BMSC)作为构建组织工程椎间盘的种子细胞。对于自体椎间盘细胞和软骨细胞而言，其无法通过无刨的途径来获取，而且体外扩增获得足够的细胞数量往往以丧失细胞的正常表型为代价。而BMSC由于具有多向分化潜能和多次传代后仍不丧失其分化能力的干细胞特性，本研究中，我们亦选用其作为髓核组织工程的种子细胞。生长因子TGF．131己被证实可以调节软骨细胞分化状态和ECM的成分，从而促进细胞外基质合成，因而被广泛地用来进行软骨类组织病变的修复。本研究以重组腺病毒载体将hTGF．pl基因导入自体BMSC，复合透明质

8、酸为支架材料，体外构建组织工程化的髓核组织，进行腰椎间盘退变修复的试验研究。据我们所知，目前国内外尚没有使用hTGF．D1基因修饰的BMSC作为椎间盘组织工程种子细胞的相关报道。