hif-α反义寡核苷酸对宫颈癌hela细胞生长抑制作用及hif-α、vegf表达影响

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1、ＨＩＦ．１ａ反义脱氧寡核苷酸对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞生长的抑制作用及ＨＩＦ．１ａ、ＶＥＧＦ表达的影响硕士研究生：于海华指导教师：韩璐教授专业名称：妇产科学摘要背景：近年来，反义技术广泛地应用于肿瘤基因治疗的研究中，随着基因组学、蛋白组学的研究，已筛选出部分在肿瘤转化、发展过程中的靶基因可作为治疗的靶标。有学者发现，缺氧诱导因子．１ａ（ＨＩＦ．１ａ）是介导肿瘤细胞缺氧适应的关键性转录调控因子，在多种恶性实体瘤中高表达。ＨＩＦ．１ａ可调节多种靶基因如血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、红细胞生成素（ＥＰＯ）等的表达，维持肿瘤细胞的能量代谢，影响新血管的生成，

2、促进肿瘤的增殖和转移。血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在内皮生长及肿瘤发生中具有重要作用，肿瘤的生长和扩散转移与血管生成密切相关。因此，ＨＩＦ．１ａ可能是肿瘤基因治疗中一个极具潜力的靶点。目的：应用ＨＩＦ—ｌａ反义脱氧寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）来处理体外培养的宫颈癌Ｈｅｌａ细胞，研究反义脱氧寡核苷酸封闭ＨＩＦ一１Ｑ基因对体外宫颈癌Ｈｅｌａ细胞生长的抑制作用及对ＨＩＦ．１ｄ、ＶＥＧＦ表达的影响，力求为今后进行针对ＨＩＦ．１ｄ的妇科肿瘤基因治疗探寻一条新的可行途径。方法：１、对体外培养的宫颈癌Ｈｅｌａ细胞进行转染。实验分为ＨＩＦ一１ｎ反义脱氧寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ

3、）组、ＨＩＦ．１ｎ正义脱氧寡核苷酸（ＳＯＤＮ）组、脂质体对照组及空白对照组。２、采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法，检测ＨＩＦ一１ａＡＳＯＤＮ对体外宫颈癌Ｈｅｌａ细胞株增殖的影响。３、应用间接免疫荧光技术检测ＡＳＯＤＮ组、ＳＯＤＮ组、脂质体对照组及空白对照组细胞ＨＩＦ．１Ｑ和ＶＥＧＦ的表达。４、逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ—ＰｅＲ）检测各组细胞ＨＩＦ—ｌＱ和ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达。５、蛋白印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）技术检测各组细胞ＨＩＦ—ｌａ和ＶＥＧＦ的蛋白表达ｔ了解ＨＩＦ－ｌａ基因的沉默效果。６、所得数据应用ＳＰＳＳｌｌ．５统计分析软件进行分析

4、。结果：１、反义脱氧寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）转染后２４ｈＢｌ３对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞发生明显的生长抑制作用，与正义脱氧寡核苷酸（ＳＯＤＮ）组、脂质体（ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥＴＭ２０００）对照组比较，抑制率差异有统计学意义（Ｐ均＜ｏ．０１）。反义脱氧寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞的生长抑制作用呈现剂量依赖性，随药物浓度增加抑制作用增强。２、ＲＴ．ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，ＡＳＯＤＮ处理组细胞ＨＩＦ．１ａ及ＶＥＧＦ基因表达与ＳＯＤＮ组、脂质体对照组及空白对照组比较，表达量明显降低，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。结果表明ＡＳ

5、ＯＤＮ特异性抑制了ＨＩＦ一１Ⅱ的基因表达。３、间接免疫荧光技术检测ＨＩＦ．１旺在胞浆及胞核中均着色，而ＶＥＧＦ着色主要分布在胞浆。ＡＳＯＤＮ处理组细胞ＨＩＦ．１缸及ＶＥＧＦ的荧光强度均明显弱于对照组，说明ＡＳＯＤＮ对ＨＩＦ—ｌａ及ＶＥＧＦ的表达有明显的抑制作用。此结果与ＲＴ．ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的分析结果一致，进一步为ＡＳＯＤＮ对ＨＩＦ—ｌａ￥［ＩＶＥＧＦ的基因表达具有抑制作用提供了实验依据。结论：１、ＨＩＦ．Ｉａ在胞浆及胞核中均表达，而ＶＥＧＦ仅在胞浆中表达。２、脂质体转染ＨＩＦ．１。ＡＳＯＤＮ具有明显抑制富颈癌Ｈｅｌａ细胞的增殖活性及下

6、调ＨＩＦ．１ｏ、ＶＥＧＦ基因表达的作用。３、ＨＩＦ．１ⅡＡＳＯＤＮ转染可以作为宫颈癌治疗的一种新思路。关键词：宫颈肿瘤缺氧诱导因子一１Ｈｅｌａ细胞反义脱氧寡核苷酸血管内皮生长因子ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＨｅｌａｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＩＦ－１ｎａｎｄＶＥＧＦｂｙａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇＯｄｅｘｙｎｕｃｌｅＯｔｉｄｅｔａｒｇｅｔｉｎｇｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒｌａｇｅｎｅＭａｓｔｅｒｄｅｇｒｅｅｃａｎｄｉｄａｔｅ：ＹｕＨａｉｈｕａＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＰｒｏｆｅｓｓｏｒＨａｒｔＬｕＭａｊｏｒ：Ｇ

7、ｙｎａｅｃｏｌｏｇｙａｎｄＯｂｓｔｅｔｒｉｃｓＡｂｓｔｒａｃｔＢａｃｋｇｒｏｕｎｄ：Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，ａｎｔｉｓｅｎｓｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＷａＳｇｅｎｅｒａｌｌｙａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｕｍｏｕｒｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｈｙ．Ｗｉｔｌｌｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｇｅｎｏｍｉ＇ｃｓａｎｄｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓＳｏｍｅｏｆｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｗａｓｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｉｎｔｈｅｃｏｕｒｓｅｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｕｍｏｕｒ．ｓｏｍｅａｕｔｈｏｒｄｉｓｃｏｖｅｒｔｈａ

8、ｔＨＩＦ－ｌａｍａｙｂｅｔｈｅｋｅｙｔｒａｎｓｌａｔｏｒ－ｆａｃｔｏｒｔｏａｄａｐｔｔｈｅｈｙｐｏｘｉａｃｏ