hif-α反义寡核苷酸对宫颈癌hela细胞生长的抑制作用及hif-α、vegf表达的影响

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1、ＨＩＦ．１ａ反义寡核苷酸对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞生长的抑制作用及ＨＩＦ．１ａ、ＶＥＧＦ表达的影响于海华计：学位论文：２７页表插格：图：１个７幅指导教师：韩璐教授申请学位级别：硕士学位论文提交日期：２００７年４月学位授予单位：大连医科大学专业名称：妇产科学论文答辩日期：２００７年５月学位授予时间：２００７年６月评阅人：答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我

2、一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：逖Ｅ月生年俎监ｔ学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。论文作者签名：指导教师签名：签字日期：丝！互年生月笪日ＨＩＦ．１ａ反义脱氧寡核苷酸对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞生长的抑制作用及ＨＩＦ．１ａ、ＶＥＧＦ表达的影响

3、硕士研究生：于海华指导教师：韩璐教授专业名称：妇产科学摘要背景：近年来，反义技术广泛地应用于肿瘤基因治疗的研究中，随着基因组学、蛋白组学的研究，已筛选出部分在肿瘤转化、发展过程中的靶基因可作为治疗的靶标。有学者发现，缺氧诱导因子．１ａ（ＨＩＦ．１ａ）是介导肿瘤细胞缺氧适应的关键性转录调控因子，在多种恶性实体瘤中高表达。ＨＩＦ．１ａ可调节多种靶基因如血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、红细胞生成素（ＥＰＯ）等的表达，维持肿瘤细胞的能量代谢，影响新血管的生成，促进肿瘤的增殖和转移。血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在内皮生长及肿瘤发生中具有重要作用，肿瘤的生长和扩散转移与血管生成密切相关。因

4、此，ＨＩＦ．１ａ可能是肿瘤基因治疗中一个极具潜力的靶点。目的：应用ＨＩＦ—ｌａ反义脱氧寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）来处理体外培养的宫颈癌Ｈｅｌａ细胞，研究反义脱氧寡核苷酸封闭ＨＩＦ一１Ｑ基因对体外宫颈癌Ｈｅｌａ细胞生长的抑制作用及对ＨＩＦ．１ｄ、ＶＥＧＦ表达的影响，力求为今后进行针对ＨＩＦ．１ｄ的妇科肿瘤基因治疗探寻一条新的可行途径。方法：１、对体外培养的宫颈癌Ｈｅｌａ细胞进行转染。实验分为ＨＩＦ一１ｎ反义脱氧寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）组、ＨＩＦ．１ｎ正义脱氧寡核苷酸（ＳＯＤＮ）组、脂质体对照组及空白对照组。２、采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法，检测ＨＩＦ一１ａＡＳＯＤＮ对体外宫颈癌Ｈｅｌ

5、ａ细胞株增殖的影响。３、应用间接免疫荧光技术检测ＡＳＯＤＮ组、ＳＯＤＮ组、脂质体对照组及空白对照组细胞ＨＩＦ．１Ｑ和ＶＥＧＦ的表达。４、逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ—ＰｅＲ）检测各组细胞ＨＩＦ—ｌＱ和ＶＥＧＦｍＲＮＡ的表达。５、蛋白印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）技术检测各组细胞ＨＩＦ—ｌａ和ＶＥＧＦ的蛋白表达ｔ了解ＨＩＦ－ｌａ基因的沉默效果。６、所得数据应用ＳＰＳＳｌｌ．５统计分析软件进行分析。结果：１、反义脱氧寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）转染后２４ｈＢｌ３对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞发生明显的生长抑制作用，与正义脱氧寡核苷酸（ＳＯＤＮ）组、脂质体（ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥＴＭ２０００）对照组

6、比较，抑制率差异有统计学意义（Ｐ均＜ｏ．０１）。反义脱氧寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）对宫颈癌Ｈｅｌａ细胞的生长抑制作用呈现剂量依赖性，随药物浓度增加抑制作用增强。２、ＲＴ．ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，ＡＳＯＤＮ处理组细胞ＨＩＦ．１ａ及ＶＥＧＦ基因表达与ＳＯＤＮ组、脂质体对照组及空白对照组比较，表达量明显降低，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。结果表明ＡＳＯＤＮ特异性抑制了ＨＩＦ一１Ⅱ的基因表达。３、间接免疫荧光技术检测ＨＩＦ．１旺在胞浆及胞核中均着色，而ＶＥＧＦ着色主要分布在胞浆。ＡＳＯＤＮ处理组细胞ＨＩＦ．１缸及ＶＥＧＦ的荧光强度均明显弱于对照组，说明ＡＳＯＤＮ对ＨＩＦ—

7、ｌａ及ＶＥＧＦ的表达有明显的抑制作用。此结果与ＲＴ．ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的分析结果一致，进一步为ＡＳＯＤＮ对ＨＩＦ—ｌａ￥［ＩＶＥＧＦ的基因表达具有抑制作用提供了实验依据。结论：１、ＨＩＦ．Ｉａ在胞浆及胞核中均表达，而ＶＥＧＦ仅在胞浆中表达。２、脂质体转染ＨＩＦ．１。ＡＳＯＤＮ具有明显抑制富颈癌Ｈｅｌａ细胞的增殖活性及下调ＨＩＦ．１ｏ、ＶＥＧＦ基因表达的作用。３、ＨＩＦ．１ⅡＡＳＯＤＮ转染可以作为宫颈癌治疗的一种新思路。关键词：宫颈肿瘤缺氧诱导因子一１Ｈｅ