间充质干细胞及其因子对腹透相关性腹膜纤维化的影响

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1、分类号：R629.5单位代码：10159密级：公开学号：117232硕士学位论文（临床医学七年制研究生）中文题目：间充质干细胞及其因子对腹透相关性腹膜纤维化的影响英文题目：TheEffectofmesenchymalstemcellsandstemsellfactorsonperitonealdialysis-associatedperitonealfibrosis论文作者：杭天宇指导教师：马健飞教授学科专业：内科学完成时间：2018年3月中国医科大学研究生学位论文中国医科大学硕士学位论文间充质干细胞及其因子对腹透相关性腹

2、膜纤维化的影响TheEffectofmesenchymalstemcellsandstemsellfactorsonperitonealdialysis-associatedperitonealfibrosis论文作者杭天宇指导教师马健飞教授申请学位医学硕士培养单位中国医科大学附属第一医院一级学科临床医学二级学科内科学研究方向肾脏内科论文起止时间2017年4月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月中国医科大学研究生学位论文摘要目的：旨在探讨人脐带间充质干细胞对腹膜透析大鼠腹膜纤维化的影

3、响以及人脐带间充质干细胞上清液（干细胞因子）对高糖诱导人腹膜间皮细胞转分化的影响方法：（1）动物实验：采用6-8周龄的雄性SD大鼠24只，随机分为盐水对照组（n=6），腹膜纤维化组（n=6），治疗组1（n=6）以及治疗组2（n=6）。以腹腔注射腹膜透析液的方法构建大鼠腹膜透析模型。除盐水对照组外各组大鼠均按照100ml/kg的剂量隔日腹腔注射4.25%腹膜透析液，共28天。而盐水对照组大鼠按100ml/kg的剂量隔日腹腔注射生理盐水，共28天。治疗组1于注射腹膜透析液的第7天以及第14天给予腹腔注射1ml人脐带间充质干细胞

4、（Human6umbilicalcordmesenchymalstemcells，HUC-MSCSs）（2×10）治疗。治疗6组2于注射腹膜透析液的第14天以及第21天给予腹腔注射1mlMSCs（2×10）治疗。28天后取各组腹膜透析液进行腹膜平衡试验，并留取腹膜组织进行HE染色，Masson三色染色和免疫组化染色以观察大鼠腹膜纤维化程度以及上皮细胞间充质细胞转分化（EpithelialMesenchymalTransition，EMT）相关蛋白波形蛋白（Vimentin）以及E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量。

5、（2）细胞实验：正常对照组：采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养人腹膜间皮细胞48h。纤维化组：以含2.5%葡萄糖的10%胎牛血清RPMI-1640培养基培养人腹膜间皮细胞48小时诱导其纤维化。治疗组：同纤维化组相同，以高糖培养基培养人腹膜间皮细胞24小时，改用分别含有50%、20%、10%、5%人脐带间充质干细胞上清液的高糖培养基继续培养24h。采用western-blot方法观察腹膜细胞中EMT相关蛋白波形蛋白（Vimentin）以及E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达量的变化。并采用ELISA的方法

6、对细胞培养上清液中纤维化相关因子转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β,TGF-β）、肿瘤坏死因子-α（TumorNecrosisFactor-α，TNF-α）及氧化应激相关因子丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）的浓度进行检测。结果：（1）动物实验：腹腔注射腹膜透析液28d后，与盐水对照组相比，纤维化组的腹膜明显增厚，并出现明显炎性细胞浸润；大鼠腹膜超滤量明显减少，葡萄糖转运量明显增多，表明腹膜功能降低；E-ca

7、dherin表达量降低而VimentinI中国医科大学研究生学位论文表达量增高。相反，与腹膜纤维化组相比治疗组1、2的腹膜明显减薄，炎性细胞浸润减轻；同时大鼠腹膜超滤量明显增多，葡萄糖转运量明显降低，腹膜功能得到改善；E-cadherin表达量增高而Vimentin表达量减少。且治疗组1的改善程度较治疗组2的水平更佳。（2）细胞实验：与正常对照组细胞相比，加入高糖培养基培养48h后细胞表现为Vimentin表达明显增加，而E-cadherin表达减少，提示腹膜间皮细胞出现了明显的纤维化。细胞培养液中与发生EMT密切相关的细

8、胞因子TGF-β1，TNF-α含量增多，氧化应激相关因子MDA含量增多而SOD含量降低。治疗组与纤维化组相比表现为Vimentin表达明显减少，而E-cadherin表达增多，同时细胞培养液中TGF-β1，TNF-α含量在HUC-MSCSs上清液的干预治疗下降低，MDA含量在干预治疗后降低而SOD含量则