医药学药学毕业论文 sirna逆转肺耐药相关蛋白表达介导的白血病细胞多药耐药

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学药学论文题目：SiRNA逆转肺耐药相关蛋白表达介导的白血病细胞多药耐药指导老师：XXX二〇一一年十二月十日【摘要】　　目的：研究双链短干扰RNA（siRNA）对白血病多药耐药细胞模型（K562/NaB）肺耐药相关蛋白（LRP）表达及功能的影响.方法：针对LRP基因设计合成特异性siRNA，在脂质体介导下转染K562/NaB；采用半定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测K562细胞LRPmRNA的水平；用流式细胞术检测K562/NaB细胞LRP蛋白表达的变化和细胞内

2、柔红霉素（DNR）的蓄积；MTT法检测阿霉素（ADM）对K562/NaB细胞耐药的半数抑制浓度（IC50）.结果：siRNA转染后：K562/NaB细胞的LRPmRMA水平明显降低；LRP蛋白表达由阳性转为阴性；细胞内DNR的蓄积明显增加，DNR平均荧光增强3.28倍；对ADM药物敏感相对逆转效率为78.18%.结论：siRNA可逆转由LRP介导的白血病细胞多药耐药.【关键词】RNA，小分子干扰；基因，肺耐药相关蛋白；K562细胞；抗药性，多药　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectofshortinte

3、rferingRNA(siRNA)onexpressionandfunctionoflungresistancerelatedprotein(LRP)inthemultidrugresistanthumanleukemiacells(K562/NaB).METHODS:MultidrugresistantK562cellswithhighlevelLRPexpressiontreatedwithsodiumbutyrate(NaB),wasusedasaninvitromodelsystem.LRPspecificsiRNAwassy

4、nthesizedandtransfectedintotheK562/NaBcells.ExpressionofLRPmRNAwasdetectedbyreversetranscriptasepolymerasechainreaction(RTPCR),andproteinlevelandintracellulardaunorubicin(DNR)accumulationinK562/NaBcellsweredetectedbyflowcytometry.50%inhibitionconcentration(IC50)ofadriamy

5、cin(ADM)onK562/NaBcellswasdetectedbyMTTmethod.RESULTS:LRPmRNAlevelwasdecreasedobviously;theproteinexpressionwasturnedfrompositiveresulttonegativeresult.IntracellularDNRaccumulationwasincreasedandthemeanfluorescenceofDNRwas3.28timeshigher.TherelativeefficiencytoADMwas78.18％

6、.CONCLUSION:ThesiRNAcouldeffectivelyreversethemultidrugresistanceofleukemiacellsinducedbyLRP.　　【Keywords】RNA,smallinterfering;gene,lungresistancerelatedprotein;K562cells;drugresistance,multiple　　0引言　　肺耐药相关蛋白（lungrelatedresistantprotein，LRP）是一种新型的与多药耐药（multidrugresistan

7、ce，MDR）相关的糖蛋白，主要导致细胞内药物聚集缺陷，而在多种肿瘤细胞内引起MDR.在儿童白血病以及成人髓系白血病（AML）中，LRP表达是独立的预后决定因素之一，其过度表达造成患者对化疗不敏感，提示预后不良［1-2］.双链短干扰RNA（shortinterferingRNA，siRNA）介导的RNA干扰（RNAinterference，RNAi），是在特异性抑制哺乳动物细胞基因方面的最新突破［3-4］.我们在建立了经丁酸钠（sodiumbutyrate，NaB）诱导人AML系K562细胞，高表达LRP并介导多药耐药的细胞模型（K562/

8、NaB）的基础上［5］，设计合成了LRP特异性siRNALRP，并转染上述细胞模型，观察siRNALRP抑制LRP基因和蛋白表达、消除LRP改变细胞内药物蓄积和分布作用的效果