反相高效液相色谱法测定全血中环孢素A的浓度.doc

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1、反相高效液相色谱法测定全血中环孢素A的浓度作者：张卫东，王国团，朱春梅【关键词】反相高效液相色谱法;环孢素A;血药浓度监测　　［摘要］目的:建立检测患者全血中环孢素A（CsA）浓度的高效液相色谱法。方法:血样经乙醚-石油醚（70∶30）萃取后，以C18硅胶键合相为固定相，乙腈-甲醇（80∶20）为流动相，70℃柱温下进行色谱分析，紫外检测波长为210nm。结果:CsA全血浓度在50～1600ng.mL范围内呈良好的线性关系，r=0.9998，方法的平均回收率为97.6%，日内和日间精密度RSD均小于6%（n=5），最低检测限为10ng.mL。结论:

2、本法简便、快速，易于开展，用于肾移植术后患者CsA的血药浓度监测，效果良好。　　［关键词］反相高效液相色谱法;环孢素A;血药浓度监测DeterminationofcyclosporinAinhumanwholebloodbyRP-HPLC18columnandamobilephaseofacetonitrile-methanol（80∶20）.Thecolumntemperaturewasmaintainedat70℃andCsAwasdetectedat210nm.Results:Agoodlinearrelationshipwasobtaine

3、dbetweenthecon-centrationofCsAfrom50ng.mLto1600ng.mL，r=0.9998.TheaveragerecoveryrateofCsAwas97.6%，andtheRSDwithinadayandbe-tweendayswerelessthan6%（n=5）.ThedetectionlimitofCsAwas10ng.mL.Conclusions:Theestablishedmethodwasaccurate，simple，sensitiveandsuitableforthetherapeuticmoni

4、toringofCsA.［Keywords］RP-HPLC;CyclosporinA;Therapeuticdrugmonitoring环孢素A（CyclosporinA，CsA）是一种选择性的免疫抑制剂，广泛用于器官移植疾病及其它疾病治疗［1，2］。由于CsA体内过程的个体差异较大，其血药浓度过高或过低都会引起毒副反应，因此在患者治疗过程中需常规监测血药浓度，从而提高移植器官或组织的存活率并降低对肾脏和肝脏的毒副作用［3］。目前国内外测定全血中CsA的方法主要有荧光偏振免疫法（FPIA）和高效液相色谱法。FPIA法因简便、快速而受到临床欢迎，但其

5、测定成本昂贵，且该法易受代谢产物等因素的干扰，使测定结果偏高;HPLC法有固相萃取法和液-液多步萃取法［4、5］，操作较繁琐，但成本较低。为此，本文建立了一种简便可行的RP-HPLC法测定CsA全血浓度，用于肾移植术后患者CsA血药浓度监测，效果良好。　　1材料和方法4　　1.1仪器高效液相色谱仪（美国Waters公司，510型泵，486型紫外检测器）;色谱柱恒温箱（天津金州科学仪器公司，AT-130），快速混匀器（江西医疗仪器厂，YHK型）;台式离心机（上海安亭科学仪器厂，KDC-16H）;微量分析天平（美国TG322A）。1.2试剂与药品CsA

6、和CsD标准品（中国药品生物制品检定所，0668-0203、0669-0206），乙腈、甲醇为色谱纯（美国Dik-mapure，20050318、20050116），其他试剂为分析纯。　　1.3标准溶液的配制精密称取CsA标准品8mg，用甲醇溶解并定容于100mL容量瓶（80μg.ml）得贮备液，保存于-20℃冰箱中。精密称取CsD标准品5mg，用甲醇定容至100mL容量瓶中，配制成贮备液，取CsD储备液4mL用甲醇稀释至100mL容量瓶，配制成2000ng.mL的内标工作液。1.4色谱条件固定相:Nova-PakC18柱（4μm，3.9mm×15

7、0mm）（美国Waters仪器公司），柱温:70℃;流动相:乙腈-水（80∶20），流速:0.8mL.min;检测波长:210nm;灵敏度:0.005AUFS。　　1.5样品处理0.5mL血样中加100μL内标工作液，旋涡混匀后，加入150μL250mmol.L的氢氧化钠液，旋涡混匀后置45～50℃水浴孵育约5min破坏RBC，再混匀后，加3mL石油醚-乙醚（70∶30），旋涡提取8min，3000r.min离心3min，分离有机层于尖底试管，于45～50℃水浴通氮气吹干，再加300μL甲醇溶解后，分别用1mL正己烷-正庚烷（50∶50）反萃取两次

8、后，1500r.min离心3min后吸弃上层液，于45～50℃水浴通氮气吹干，残渣用50μL甲醇充分溶解，按“色谱条件”项