反相高效液相色谱法测定肾移植术后全血环孢素A浓度.doc

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1、反相高效液相色谱法测定肾移植术后全血环孢素A浓度作者：张炜，张想旺，夏晓君，彭旭阳【摘要】目的建立单步萃取反相高效液相色谱法测定人全血中环孢素Ａ(CsA)浓度。方法病人血样经乙醚单步萃取，环孢素D(CsD)为内标，C18色谱柱，乙腈-水(80：20)为流动相，流速1.0ml/min，柱温70℃，检测波长214nm。结果CsA全血浓度在50~600ng/ml范围内线性关系良好，r=0.9998，最低检测浓度为20ng/ml，平均回收率100.44%，日内和日间RSD均<5%。结论本法简便灵敏、准确可靠、经济，可用于临床人体器官移植术后全血中CsA浓度的监测。【关键词】环孢素A；反相高效

2、液相色谱法；血药浓度监测Abstract：ObjectiveToestablishamethodofreversedphasehigh-performanceliquidchromatography(RP-HPLC)forthedeterminationofcyclosporinA(CsA)inthewholebloodbysingle-stepextractioninthepatientsafterrenaltransplantation.MethodsCsAwasextractedfromthewholebloodwithdiethyletherandseparatedusingaC1

3、8column.CyclosporinDwasusedasinternalstandard.Themobilephasewascomposedofacetonitrile-water(80:20).Theflowratewas1.0ml/min,thetemperaturewasmaintainedat70℃andthedetectingwavelengthwas214nm.ResultsTheassaywasshowntoproducelinearcalibrationcurvesovertherangefrom50to600ng/mlforCsA(r=0.9998).Thelowest

4、plasmalimitationwas20ng/ml.Theaveragerecoverywas100.44%,andtherelativestandarddeviation(RSD)withinonedayandbetweendaysdidnotexceed5%.ConclusionThemethodofRP-HPLCisconvenient,accurateandeconomicalforthedeterminationofCsAinthewholebloodofthepatientsafterrenaltransplantation.Keywords：cyclosporinA;rev

5、ersedphasehigh-performanceliquidchromatography;therapeuticdrugmonitoring环孢素A(CyclosporineA，简称CsA)是一种高效免疫抑制剂，临床主要用于器官移植术后防止排斥反应，提高病人的生存率和移植物的存活率［1］。但由于其治疗窗狭窄，药代动力学参数个体差异大，易产生肾毒害等严重不良反应［2~3］。而且CsA血药浓度水平受到性别、年龄、药物相互作用以及饮食等众多因素的影响［34］。因此，监测全血中CsA的浓度并调整其浓度在有效范围已成为临床使用CsA的常规医疗项目［5］。目前高效液相色谱法(HPLC)和荧光偏振免

6、疫法(FPIA)为CsA浓度测定的最常用方法。国内文献报道的HPLC法，样品预处理一般采用多步萃取法［6~8］，其缺点是操作繁琐、测定周期长、实验成本高；单步萃取法简化了操作过程，测定周期缩短。本研究较系统探讨并建立了一种单步萃取反相高效液相色谱法测定全血中CsA浓度的改良方法，该法具有简便灵敏、准确可靠、经济的特点。现报告如下。1材料与方法1.1仪器与试剂（1）仪器：高效液相色谱仪(日本岛津公司LC-10ACS-LIGHT软件)；柱温箱（天津恒奥科技发展有限公司）；快速混匀器（上海医科大学仪器厂）；台式离心机（上海手术器械厂）；超声清洗器（天津东康科技有限公司）；微量分析天平（瑞士梅特勒

7、-托利多公司）。（2）试剂：CsA、CsD对照品（CsA含量为99.3%，CsD含量为97.0%；均由华北制药集团提供）；乙腈、甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其余试剂均为分析纯。1.2色谱条件色谱柱：C18(美国5μm，4.6mm×250mm)；流动相：乙腈-水（80：20）；流速：1.0ml/min；检测波长214nm；柱温70℃；灵敏度0.005AUFS；进样量20μl。1.3标准溶液的配置精密称取CsA和CsD对照品用