aac法处理番茄酱废水过程中微生物总dna的提取及扩增条件的研究

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1、AAC法处理番茄酱废水过程中微生物总DNA的提取及扩增条件的研究AAC法处理番茄酱废水过程中微生物总DNA的提取及扩增条件的研究目录目录………………………………………………………………………………….1摘要……………………………………………………………………………………3Abstract…………………………………………………………………………………………………1.文献综述………………………………………………………………………………...1.1前言……………………………………………………………………………………..1.2研究目的和意义……………………………………………………………………..

2、1.3国内外的相关发展…………………………………………………………….1.4课题背景……………………………………………………………………..2.实验材料与实验方法………………………………………………..2.1实验材料……………………………………………………………………..2.1.1实验试剂……………………………………………………………2.1.2实验仪器设备……………………………………………………………….2.2实验方法………………………………………………………………………..3.实验内容…………………………………………………………………………….3.1模拟反应器的设计、简介……….………

3、………………………………………3.2DNA提取………………………………………………………………………….3.2.1酚/氯仿抽提法…………………………………………………..3.2.2改进的SDS法…………….3.2.3Reddy法……………………………………………………..3.2.4试剂盒法………………………………………………………………………3.3DNA检测……………………………………………………………………….3.3.1琼脂糖凝胶电泳检测DNA量……………………………………………………..3.3.2紫外可见分光光度计检测ＤＮＡ纯度以及浓度……………………………….3.4PCR检测………

4、…………………………………………………………………4结果与讨论………………………………………………………………………………..4.1结果…………………………………………………………………………………..4.2讨论……………………………………………………………………………………..参考文献…………………………………………………………致谢……………………………………………………………………..附件…………………………………………………………….摘要本实验中我们采用4种DNA提取方法对AAC法处理番茄酱废水过程中微生物的总DNA进行了提取，并对4种提取方法的DNA提取效果进行综合分析，发现Re

5、ddy法提取出的DNA量最多，酚仿抽提法提取出的DNA量最少，但是考虑到提取时间和提取所用的试剂和药品，改进的SDS法最好，它不但提取时间较短，所需费用较低，而且提取效果也不错。在下一步的扩增中，我们对DNA中的细菌16SrDNA片断进行了多次PCR扩增，得到了合适的扩增条件：95℃，2min；95℃,45s；50℃，45s；72℃，90s，30cycles；72℃,10min。PCR反应体系为ddH2O12.5μL,10×PCR反应缓冲液2.5μL，25.0mmol/LMgCl2溶液1.5μL,2.5mmol/LdNTP溶液2μL，2.0μmol/L引物P1、P2各2.5μL，Taq聚

6、合酶0.5个单位,样品DNA溶液2μL。关键词：AAC番茄酱DNA的提取PCRAbstractTheeffectivesoffourDNAextractionmethodsforisolationofthetotalmicrobialDNAfromtomatojuicewastewaterwerecompared.Thefourmethodswereevaluatedcomprehensivelyforseveralfactors.TheresultsshowedthatReddymethodcouldobtainthehighestDNAyield,phenol/chloroformm

7、ethodprovidedthelowestDNAyield.However,但是考虑到提取时间和提取所用的试剂和药品，改进的SDS法最好，它不但提取时间较短，所需费用较低，而且提取效果也不错。DuringthePCR，我们对DNA中的细菌16SrDNA片断进行了多次PCR扩增，得到了合适的扩增条件：95℃，2min；95℃,45s；50℃，45s；72℃，90s，30cycles；72℃,10min。PCR反应体系为ddH2O12