一种新型优化的肝组织羟脯氨酸含量测定方法的建立 .doc

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1、一种新型优化的肝组织羟脯氨酸含量测定方法的建立【摘要】目的建立一种可信度、敏感度高，适合于微量组织羟脯氨酸含量的测定方法―胃酶酸解法。方法在组织、重量、氧化时间、显色温度、样品中盐浓度及对二氨基苯甲醛（PDAB）一定的条件下，对胃酶法和传统盐酸水解法进行了比较。结果在相同条件下，传统方法测得HYP含量为0.045～1.547μg/ml，平均值为0.7789μg/ml；胃酶酸解法测得羟脯氨酸含量为2.955～4.500μg/ml，平均值为3.921μg/ml，两者比较差异有显著性（P＜0.01）。结论胃酶酸解法的可信度、敏感度均优于传统方法，其更适合于微量组织羟脯氨

2、酸的测定。【关键词】羟脯氨酸;胃酶酸解法Establishmentofanewandgrading-upassaymethodofHYPinhepatictissueXIUHe-Ming，GUOZheng-Rong，XUZheng.BethuneInternationalPeaceHospitalofPLA，Shijiazhuang050082,China【Abstract】ObjectiveToestablishaassaymethodofhydroxyprolinesuitedformicrocomponentwithhighdegreeofconfidenc

3、eandsensitiveness.MethodsThetwomethodsofgastricenzymemethodandtraditionalacidificationmethodarecomparedunderthesameconditionoftissue，weight，oxidizetime，colorationtemperature，salinityinthesampleandpara-diaminobenzaidehyde（PDAB）.ResultsAtthesamecondition，thecontentofHYPmeasuredbytraditi

4、onalmethodisbetween0.045～1.547μg/ml，themeanvalueis0.7789μg/ml；thecontentofHYPmeasuredbygastricenzymemethodisbetween2.955～4.500μg/ml，themeanvalueis3.921μg/ml.Theresultswasstatisticallysignificantdifference（P＜0.01）.ConclusionThegastricenzymemethodisbetterthanthetraditionalmethodindegree

5、ofconfidenceandsensitiveness，anditismoresuitedformicrocomponent.6【Keywords】hydroxyproline;gastricenzymeacidificationmethod羟脯氨酸（Hydroxyproline，HYP）是一种非必需氨基酸，是机体胶原蛋白的主要成分之一，几乎所有的HYP都存在于胶原中，被认为是胶原中的特征性氨基酸。因此，HYP含量的测定已成为衡量机体胶原含量的一个重要指标，寻求一种合理、优化的HYP含量的测定方法已成为众多学者关注的焦点。目前，人们多使用传统的盐酸水解法测定HY

6、P的含量，由于传统方法对组织要求量比较大，水解不够彻底等缺点限制了其广泛应用。近年来许多的学者对HYP的测定条件进行了多方面、多层次、多途径的研究，同时也深入的探讨了不同测定方法。虽然在时间、试剂用量、所需器材等方面有了很大的改进，但对其测定方法的研究欠缺，仍未能找到一种方便、快捷、可靠性高的测定方法。笔者对HYP含量测定方法进行了仔细的研究，对传统方法的缺点进行了改进，在标本重量、氧化时间、显色温度、样品中盐浓度及对二氨基苯甲醛（PDAB）一定的条件下，对两种方法进行了比较，探索出一条更为先进、稳定可靠的HYP含量检测方法。现报告如下。1材料与方法1.1主要实验

7、材料1.1.1羟脯氨酸标准品北京鼎国生物技术发展中心（进口分装）。1.1.2胃蛋白酶北京中杉生物技术有限公司（进口分装）。1.1.3氯胺－T天津市光复精细化工研究所。1.1.4对二氨基苯甲醛（PDAB）天津市博迪化工有限公司。61.1.5酶标仪美国VERSAmax。1.1.6微量电子天平瑞士METTLerAE260。1.2试剂配制1.2.1标准HYP储存液（1mg/ml）称取100mgHYP标准品，用0.1mol/L盐酸溶解并定容至100ml，置棕色瓶于4℃保存。1.2.2标准HYP应用液（25μg/ml）取标准HYP储存液（1mg/ml）2.5ml，双蒸水定容至

8、100ml