木犀草素对骨肉瘤的抑制效应及其机制研究

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1、木犀草素对骨肉瘤的抑制效应及其机制研究【摘要】目的：研究木犀草素对骨肉瘤的抑制效应及其机制；方法：以1.25g/L、2.5g/L、5g/L、10g/L的木犀草素溶液对骨肉瘤MG-63细胞行划痕实验、侵袭实验、免疫印迹实验，并观察经不同浓度木犀草素溶液培养后骨肉瘤MG-63细胞形态；结果：木犀草素对于骨肉瘤MG-63细胞的生长、增值、运动迁移能力、穿膜细胞数量、IL-6蛋白表达水平均有一定的抑制作用，并且其抑制作用随着木犀草素浓度的增加而逐渐增加；结论：一定浓度的木犀草素对于骨肉瘤MG-63细胞具有极强的抑制作用，值得应用于临床骨肉瘤

2、的治疗。【关键词】木犀草素；骨肉瘤；抑制效应；机制themechanismofinhibitoryeffectofluteolinonosteosarcoma[Abstract]Objective:inhibitoryeffectonhumanosteosarcomaanditsmechanismofluteolin;methods:1.25g/L、2.5g/L、5g/L、10g/LluteolinsolutiononosteosarcomaMG-63celllinescratchtest,invasionassay,Western

3、blot,andobservethedifferentconcentrationofmignonettefibroinsolutionculturedosteosarcomaMG-63cellmorphology;results:luteolinforosteosarcomaMG-63cellgrowth,proliferation,movementability,transmembranecellnumber,theexpressionlevelofIL-6proteinwasinhibited,andtheinhibitioni

4、ncreasedwiththeincreaseofluteolinconcentrationincreasesgradually;conclusion:acertainconcentrationofluteolinhasastronginhibitoryeffectonhumanosteosarcomaMG-63cells,treatmentisappliedtoclinicalosteosarcoma.[keyword]luteolin;osteosarcoma;inhibitoryeffect;mechanism骨肉瘤是临床相对

5、常见的恶性肿瘤，多发于少儿或青少年，该病预后不良，相当多的患者因患上该病而死亡1。近几年来，随着保肢手术的不断发展以及全新化疗药物的研制成功，骨肉瘤的治疗疗效有了较大的提高。但是，转移以及复发的骨肉瘤患者预后依然相当差，并且继发转移以及耐化疗药物骨肉瘤的出现仍然是相当严重的问题2。作为来源于植物的黄酮类物质，木犀草素能够干扰骨肉瘤细胞新陈代谢的正常进行，抑制其生长，诱导其凋亡，对于骨肉瘤的治疗具有较高的应用价值3、4。为研究木犀草素对骨肉瘤的抑制效应及其机制，为临床治疗骨肉瘤提供依据，我院于2013年6月——2014年5月展开相关研

6、究，其效果显著，现作如下总结报道。1材料与方法1.1材料细胞系：选择浙江大学药学院培养的人体骨肉瘤MG-63细胞系。药物：木犀草素（Sigma公司产品）试剂：小牛血清（GIBCO公司产品），RPM1640培养基粉剂（GIBCO公司产品），胰蛋白酶（Amersco公司产品），β-actin抗体（Sigma公司产品），IL-6（Sigma公司产品），辣根过氧化物酶标记二抗（Jackson公司产品）。仪器：通用台式冷冻离心机（Sigma公司产品）、倒置相差显微镜（OLYMPUS公司产品）、SG403A-HE生物安全柜（Baker公司产品）

7、、CO2培养箱（Forma公司产品）、全自动高压灭菌锅（ALP产品）、电子分析天平（Sigma公司产品）、紫外-可见光光度计（Hach公司产品）。1.2实验方法1.2.1细胞系培养：将骨肉瘤MG-63细胞系置于37℃、5%CO2培养箱内，以小牛血清（10%）、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素配置而成的RPM1640培养液贴壁培养。倒置荧光显微镜观察骨肉瘤MG-63细胞生长，胰蛋白酶（0.25%）消化传代，选择处于生长期的骨肉瘤细胞进行实验。1.2.2观察骨肉瘤MG-63细胞形态取6孔培养板，每孔分别滴加骨肉瘤MG-63细胞

8、悬浊液1mL，然后分别滴加100μL浓度为1.25g/L、2.5g/L、5g/L、10g/L的木犀草素溶液以及等量磷酸盐缓冲液进行对照，于常规条件下进行培养。24h后使用倒置相差显微镜观察已培养好的肿瘤细胞样本，记录其形态特点，各浓度