饮用水中微囊藻毒素化学检测方法-固相萃取与高效液相层析

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1、飲用水中微囊藻毒素化學檢測方法－固相萃取與高效液相層析／串聯式質譜儀法NIEAW539.50B一、方法概要　　本方法使用高效液相層析串聯式質譜儀（HPLC/MS-MS）檢測飲用水中的兩種微囊藻毒素（Microcystins，簡稱MCs）MC-LR及MC-RR予以定量。水樣調整pH至約10.5，經固相管柱萃取後，收集沖提液，以氮氣濃縮過濾後，以HPLC/MS-MS分析。二、適用範圍(一)本方法適用於飲用水、淨水廠淨化後出水或清水等水樣中微囊藻毒素之檢測。（單一實驗室所測得MDL：MC-LR為0.009µg/

2、L；MC-RR為0.004µg/L。）(二)本方法所使用之HPLC/MS-MS宜由具高效液相層析串聯式質譜儀分析經驗之人員，或經由訓練通過認定者擔任。(三)本方法係依效能為基準（Performance-based），可依使用的固相萃取管柱、前處理程序、高效液相層析儀、LC層析管柱及串聯式質譜儀廠牌的不同，分析人員可適當修改本方法之樣品前處理程序，惟修改後之方法其執行檢測之所有步驟及程序，應符合本方法所述品質管制規範。三、干擾(一)本方法的干擾可能來自於溶劑、試劑、玻璃器皿及樣品處理過程中所使用的硬體設備之

3、污染，干擾物質會導致層析圖基線之上移，須執行空白樣品的測試，以證明無干擾情形。(二)所有使用之實驗器皿（包含玻璃器皿和塑膠器皿）必須謹慎清洗。實驗器皿應先用甲醇潤洗，再以去離子水沖洗，存放於乾淨之環境自然風乾。(三)干擾物質可能是樣品中之其他物質，基質干擾的程度隨樣品之來源而不同。由於本方法所使用之偵測系統具選擇性，因此本方法所探討之基質中並無觀察到干擾物，如果有干擾發生，可用適當的SPE淨化去除。(四)儀器必須將MS-MS的條件調整至最佳化，以達到要求的解析度及質量的準確度。在HPLC/MS-MS中如層

4、析管柱材質、管柱的長度、內徑、層析的流速、移動相及添加劑的選擇，都足以影響分析效果及儀器感度。而電灑法又跟待測物、溶劑及流速的關係密切，所以需考量液體本身的電導係數及介電常數，以減少離子抑制的情況，以達到MS-MS分析效率的最佳化。四、設備(一)採樣瓶：1L，玻璃、PP或HDPE採樣瓶，並附螺旋瓶蓋。使用前需先清洗並乾燥。(二)定量瓶：棕色硼矽玻璃材質，10mL和25mL。(三)KD管：硼矽玻璃材質，容量15mL，可定容2.0mL。(四)分析天平：可精秤至0.1mg。(五)天平：可精秤至0.01g。(六)

5、酸鹼度計：能測量pH值至0.1單位。(七)純水裝置：Millipore公司之Milli-Q型純水系統；或同級品。(八)高效液相層析串聯式質譜儀（HPLC/MS-MS）裝置１、高效液相層析儀：HPLC（Agilent1100；1200型）；或同級品。２、串聯式質譜儀：串聯式質譜儀（ABIAPI2000；API3000MS-MS）；或同級品。３、數據處理系統：ABI公司Analyst1.42版；或其他能顯示分析物的滯留時間及尖峰面積之定性及定量系統。(九)萃取裝置１、固相萃取管柱：Oasis®HLBCartr

6、idges200mg，6mL；或Supelco填充C18-E1g，6mL；或同級品。２、固相萃取裝置：Waters，SPE萃取裝置；或同級品。３、蠕動馬達：GilsonMinipuls3型；或其他類似之蠕動馬達，可調整流速。４、真空幫浦：可調整真空度，可維持真空壓力至8-10mmHg。５、氮氣吹乾裝置（N2Evaporator）：可調整加熱溫度和氮氣吹出量。６、過濾膜：0.2mm孔徑，13mm直徑，Nylon材質；或同級品。７、過濾膜：0.45mm孔徑，47mm直徑，Nylon材質；或同級品。五、試劑(一

7、)試劑水：不含待測物之去離子水，其電阻應大於18MΩ-cm。(二)甲醇（Methanol）：HPLC級或LC/MS級；或更高純度。(三)甲酸（Formicacid）：GR級；或更高純度。(四)乙酸（Aceticacid）：GR級；或更高純度。(五)氰甲烷（Acetonitrile）：HPLC級或LC/MS級；或更高純度。(六)氨水：33%，ACS試藥級。(七)含0.1%甲酸的試劑水：HPLC級或LC/MS級。(八)液態氮氣（N2）：純度99.99%以上。(九)儲備標準溶液１、標準品購置來源（註1）：(１)

8、Microcystin-LR：購自ZEN-UBIOTECHNOLOGYCo.,LTD，純質，1mg／瓶。(２)Microcystin-RR：購自ZEN-UBIOTECHNOLOGYCo.,LTD，純質，1mg／瓶。２、儲備標準品溶液配製：(１)將2.0mL甲醇加入標準品瓶中完全混合，即為1mg/2mL＝500mg/L。(２)取上述溶液20mL加10mL甲醇，即為1mg/L。六、採樣與保存(一)使用乾淨的高密度聚乙烯（HDPE）