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1、用化学发光法检测芦丁等物质清除超氧阴离子自由基的作用_郑学钦9用化学发光法检测芦丁等物质清除超氧阴离子自由基的作用_郑学钦9用化学发光法检测芦丁等物质清除超氧阴离子自由基的作用_郑学钦9用化学发光法检测芦丁等物质清除超氧阴离子自由基的作用_郑学钦9药 理用化学发光法检测芦丁等物质清除超氧阴离子自由基的作用郑学钦 胡春1(福州1350004福建中医学院附属人民医院;广州510091广州大学轻工系)摘要 目的:考察茶叶、野菊花、山楂、芦丁对超氧阴离子自由基的清除作用。方法:以黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-鲁米诺体系作为超氧阴离子的产生体系,以化学发光的降低作为检测活
2、力的指标。结果:茶叶、野菊花、山楂、芦丁都表现出对超氧阴离子自由基的清除作用,其活力与黄酮含量有关。结论:黄酮类化合物对超氧阴离子自由基的清除是有效的。关键词 化学发光;超氧阴离子自由基;黄酮Thescavengingeffectofrutinetc.onsuperoxideradicalswithchemiluminescentmethod(AffiliatedPeople’sHospital,FujianCollegeofTraditionalZhengXueqin(ZhengXQ),HuChun(HuC)ChineseMedicine,Fuzhou
3、350004)ABSTRACT OBJECTIVE:Todeterminethescavengingeffectoftea,ChrysanthemumindicumL.,hawthornandrutinonsuperoxideradicals.METHODS:Reductionofchemiluminescenceworkedasanindexofactivitywithxanthine-xanthineoxidase-luminolsystemassuperoxideradicalsgeneratingsystem.RESULTS:Tea,Chrysa
4、nthemumidicumL.,hawthornandrutinshowedscavengingeffectonsuperoxideradicals.Theactivitywasrelatedtoitsflavonoidcontent.CONCLUSION:Flavonoidwaseffectiveinscavengingsuperoxideradicals.KEYWORDS9 chemiluminescence,superoxideradical,flavonoids黄酮类化合物有防止食用油脂过氧化作用已为中外研究者的大量研究所证实,然而黄酮类化合物是
5、否能够清除动物体内的自由基,尚未得到人们的系统证实。我们利用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系产生的超氧阴离子自由基(O2),用化学发光剂鲁米诺使体系产生化学发光的方法,考察芦丁、茶叶、野菊花、山楂提取物在体外对O2的清除作用。1 方法与试剂1.1 原料与试剂绿茶为当年茶,野菊花和山楂均为市售品。芦丁、黄嘌呤(xanthine,X)、黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XO)(提取自奶油)为国产,鲁米诺(luminol,L)为Sigma产品。所用试剂均为分析纯。1.2 试样的制备1.2.1 茶叶中多酚类物质的提取[1]热水浸提※过滤※减压浓缩※氯仿萃取※
6、水相以乙酸乙酯萃取3次※浓缩乙酸乙酯相※干燥※茶叶多酚类物质粗品。1.2.2 野菊花提取物:野菊花※干燥※粉碎※以10倍体积分数为95%的乙醇回流24h※浓缩※乙醇提取物。1.2.3 山楂水提取物:山楂※清洗※100℃热烫3min※冷却※加水匀浆※加果胶酶※静置※过滤※浓缩※干燥※9山楂水提取物。1.3 总黄酮的含量测定[2]精密称取芦丁,配成每毫升含0.332mg芦丁的甲醇标准溶液,分取0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml,分别加入50gL-1NaNO20.3ml,5min后加100gL-1Al(NO3)3ml,放30.置6min后加
7、40gL-1NaOH4ml,最后以体积分数为30%的乙醇定容至10ml,摇匀,10J,1997,Vol.31997年332卷第3期:绿茶※min以后以第一管作空白于510nm波长处测定吸光度(A510),并绘制标准曲线。茶叶等样品用同样方法测定A510,由标准曲线计算出各样品中总黄酮的含量(以芦丁计)。1.4 超氧阴离子自由基抑制作用的检测[3]1.4.1 反应物溶液的配制:X以0.05molLpH7.8的磷酸钾缓冲液(PBS)配制成-1-10.05mmolL溶液;L以0.05molLpH7.8的PBS配制成1×10-4molL-1的母液,以一定的比例混
8、合成X-L应用液;XO用PBS稀释至0.1ugml-1;芦丁及3种样品提取物分别
