流动注射化学发光法研究黄酮等物质清除超氧自由基的作用

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果流动注射化学发光法研究黄酮等物质清除超氧自由基的作用作者：赵芳杜志坚边丽张铃【摘要】　　目的建立化学发光新方法以考察黃酮等物质对超氧自由基的清除作用。方法以碱性条件下邻苯三酚自氧化作为超氧阴离子的产生体系，以化学发光的降低作为检测活力的指标。结果杭白菊、马齿苋、槲皮素、芦丁都表现出对超氧阴离子自由基的清除作用。结论该方法简单、快速，可用于中草药抗氧化活性研究。【关键词】化学发光法黃酮

2、超氧阴离子自由基Abstract：ObjectiveＴｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｅｃｔ．ｏｎｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｒａｄｉｃａｌｓ．MethodsＲｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｗｏｒｋｅｄａｓａｎｉｎｄｅｘｗｉｔｈｐｙｒｏｇａｌｌｉｃａｃｉｄｓｅｌｆ－ｏｘｉｄｅｉｎａｌｋａｌｉｎｅｍｅｄｉｕｍ．ResultsＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ，ｐｕｒｓｌａｎｅｈｅｒｂ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，ｒｕｔｉｎｓｈｏｗｅｄｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏ

3、ｎｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｒａｄｉｃａｌｓ．ConclusionＴｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄｑｕｉｃｋ．Ｉｔ课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果ｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｆｒｏｍＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂａｌｍｅｄｉｃｉｎｅｓ．Keywor

4、ds：Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ；Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ＳｕｐｅｒｏｘｉｄｅＲａｄｉｃａｌｓ　　生命活动的有氧代谢可以不断产生各种自由基，超氧阴离子自由基Ｏ－２·是其中３种有代表性的自由基之一。［１］过剩的超氧阴离子自由基Ｏ－２·对生物细胞有巨大的破坏作用，是引起人体衰老和导致癌症、冠心病、动脉硬化等多种疾病诱因之一。清除生物体内过剩自由基，寻找能够清除活性氧自由基的抗氧化剂已成为医学和生物学领域一项重要研究课题。目前常用的自由基检测方法有：电子自旋共振法［２］、电化学法［３］、毛细管电泳法、荧光光谱法、光

5、度法、色谱法等［４］。这些方法存在仪器昂贵、操作复杂、选择性差或灵敏度低等缺点。与之相比，流动注射化学发光法具有灵敏、快速、操作简单、重现性好等优点，近年来常用于自由基抗氧化剂的研究和筛选。本研究基于碱性条件下，邻苯三酚自氧化产生Ｏ－２·课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果自由基，氧化肾上腺素产生化学发光的现

6、象，建立了检测超氧阴离子自由基新体系，并成功应用于黃酮等物质对超氧阴离子清除能力的检测。１仪器与材料　　化学发光仪；恒流泵；ＢＳ１２４Ｓ电子天平；ＰＨＳ－３Ｃ精密ｐＨ计。　　邻苯三酚储备液：以１０ｍｍｏｌ／ＬＨＣｌ配制成０．１ｍｏｌ／Ｌ溶液，贮于冰箱，临用前稀释；盐酸肾上腺素标准品：１．０×１０－３ｇ／ｍｌ，用重蒸水配制于棕色容量瓶中，贮于冰箱，临用前稀释；０．１ｍｏｌＮａ２ＣＯ３－ＮａＨＣＯ３缓冲液；所有试剂均为分析纯，水为重蒸水。芦丁、槲皮素储备液：各准确称取０．５ｍｇ，分别用少量甲醇溶解后，二次蒸馏水定容于５

7、０ｍｌ容量瓶待用。２方法２．１样品中黃酮类物质的提取及试样制备干杭白菊→粉碎→１０倍量９５％乙醇浸泡１ｈ，回流提取２次，每次９０ｍｉｎ→残渣用９５％乙醇洗至无色，合并滤液→减压浓缩→乙醇提取物。马齿苋→干燥粉碎→石油醚脱脂两次→弃石油醚提取液→挥干浸膏石油醚→１０倍量９５％乙醇回流提取两次，每次１ｈ→合并滤液→减压浓缩→乙醇提取物。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有

8、先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果２．２超氧阴离子自由基Ｏ－２·检测方法如图１所示，分别将邻苯三酚、缓冲溶液和肾上腺素通过相应管道泵入分析系统，邻苯三酚、缓冲液和肾上腺素混合后产生化学发光信号，待信号稳定后，注入清除剂，以相对峰高计算发光抑制率。P.蠕动泵V.阀F.流通池W.废液D.检测器PC.计算机图1流动注射化学发光仪示意图２．