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1、强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响作者：陈凯佳 刘小斌 邱仕君 周健洪【摘要】：目的观察强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法使用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,5-溴脱氧嘧啶(Brdu)和CD44、CD54双重免疫组化鉴定,传3代后的MSCs分为强肌健力口服液含药血清组和空白血清对照组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测2组MSCs的生长情况。结果强肌健力口服液含药血清组以浓度依赖方式促进MSCs的增殖活力,与相应浓度的空白血清对照组比较差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01
2、)。结论补脾法(强肌健力口服液含药血清)能促进干细胞的生长。【关键词】补脾法 强肌健力口服液 骨髓间充质干细胞 含药血清 Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofserumcontainingQiangjijianlioralliquidin-vitroproliferationofratmesenchymalstemcells(MSCs).MethodsRatmesenchymalstemcellsdissociatedfromthebonemarrowbydensitygradientmethodwerecul
3、tured.MSCswereidentifiedbymarkingofbromodeoxyuridine(Brdu)andstainingofCD44,CD45.9ExperimentalgroupwascultivatedwithserumcontainingQiangjijianlioralliquidandcontrolgroupwithblankserum.OpticalabsorptionvalueofMSCswasstainedbymethylthiazolyltetrazolium(MTT).ResultsSerumcontainingQ
4、iangjijianlioralliquidatdifferentconcentrationscouldpromotetheproliferationofMSCs,thedifferencebeingsignificantincomparisonwiththecontrolgroup(P<0.05orP<0.01).ConclusionInvigoratingthespleen(serumcontainingQiangjijianlioralliquid)canenhancetheproliferationofMSCs. Keywords
5、：invigoratingthespleen；Qiangjijianlioralliquid；mesenchymalstemcells；serumcontainingdrug 骨髓间充质干细胞(MSCs)是干细胞中的一种,主要存在于全身结缔组织和器官间质中,以骨髓组织中含量最为丰富。MSCs具有易分离、扩增以及体外操作简便等特点,并能在一定的诱导条件下向成骨细胞、成肌细胞等中胚层细胞分化,其应用前景极其广阔。本研究在邓铁涛教授“脾肾相关”的理论指导下,探讨补脾法(强肌健力口服液含药血清)对大鼠MSCs增殖的影响。 1材料与方法9 1.1动物 纯种S
6、D大鼠,SPF级,4周龄,体重90～130g,用于MSCs细胞的提取；纯种SD大鼠,SPF级,成年,体重180～220g,用于含药血清的制备,由广州中医药大学实验动物中心提供,许可证号：粤鉴证字2005A031SCXK(粤)2003-0001。 1.2主要试剂 IMDM培养基、特级胎牛血清、胎牛血清(FBS)：美国GIBCOL公司产品；链霉亲和素生物素复合物(SABC)、二氨基联苯胺(DAB)染色试剂盒、抗体CD44、抗体CD54、增殖细胞核抗原(PCNA)、生物素化二抗(羊抗小鼠)、AEC显色剂、BCTP/NBT显色剂：武汉博士德公司；四甲基偶氮
7、唑蓝(噻唑蓝,MTT)、5-溴脱氧嘧啶(Brdu)及其单克隆小鼠抗体：美国Sigma公司；D-Hank’s液、TBS、PBS、2%台盼蓝染液、0.25%胰酶、马血清：广州威佳公司提供。 1.3强肌健力口服液含药血清的制备9 强肌健力口服液(黄芪、党参、白术、当归、甘草等)由广州中医药大学新药开发中心提供,批号20040701,临床批件号2003L00874,含原药材1204g/L。采用成年SPF级SD大鼠,分为实验组、对照组,每组5只。实验组每日给予强肌健力口服液灌胃,灌胃剂量以50kg体重成人的常规用量,按大鼠体重转换系数计算,含原药材36.12
8、g/kg,连灌1周。对照组则给予等体积蒸馏水灌胃,连灌1周。最后1次灌胃后2h,无菌条件下开胸
