幽门螺杆菌ⅳ型分泌系统cagx基因的克隆及生物信息学特征预测

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1、幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagX基因的克隆及生物信息学特征预测【摘要】目的：构建表达幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，H.pylori）NCTC11637IV型分泌系统cagX(HP0528)全长编码基因的原核表达载体。方法：用PCR方法从H.pylori基因组DNA中扩增cagX编码基因片段，将cagX克隆至pGEM-T载体，转化大肠杆菌DH5α，再将其定向插入pET32a(+)载体中，经IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果，并进行序列测定和生物信息学预测。结果：克隆幽门螺杆菌NCTC1163

2、7cagX基因全长1569bp（基因库登录号为EF608160），编码522个氨基酸，融合蛋白的相对分子质量约为80.5kD。与基因库公布的其他H.pylori菌株基因序列的核苷酸同源性为96%～99%。预测结果显示H.pylori11637，26695，J99间二级结构有一定差异，但抗原性相同。结论：成功克隆并表达了H.pyloriNCTC11637cagX基因，并对其生物学特征进行了预测，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。【关键词】幽门螺杆菌；cagX；IV型分泌系统；生物信息；序列分析［Abstract］Obj

3、ective:TheprokaryoticexpressionvectorforgeneencodingthefusionproteincagXoftypeIVsecretion16system(TFSS)wasconstructedandexpressed.Methods：H.pyloricagXgenewasamplifiedbyPCRusingthegenomeDNA.ThePCRproductwasinsertedintopGEM-TvectorandthentransformedintoE.coliDH5α.

4、Thepositiverecombinantclonewasanalyzedbydigestionofrestrictionendonuclease.ThenthecagXgenefragmentwasinserteddirectionallyintovectorpET32a(+)toconstructrecombinantclonesofcagX.AftertheywereexpressedbyBL-21E.colicells,thePCRproductsweresequencedandanalyzed.Result

5、s：A1569basepairslongcagXgene,whichencodesaproductof522aminoacid,wasobtainedusingPCRmethodandwasclonedintopGEM-Tvectorsuccessfully.Itwasfoundthattherelativemolecularweightofthisfusionproteinwasapproximatelyabout80.5kD.GenBankaccessionnumberisEF608160.Thesequencea

6、nalysisforcagXshowedthatitshares96%～99%homologywithotherstrainsinGenBank.Theresultofanalysisrevesledthattherewerecertaindifferencesinsecondarystructure,buttheantigenicitywasidentical.Conclusion：ItwasindicatedthatwehadobtainedthecorrectcagXgene，whichposedabasisfo

7、rfurtherresearchingonitsbiologicalfunction.［Keywords］Helicobacterpylori;cagX;typeIVsecretion16system；bioinformatics；sequenceanalysis　　幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是一种定植于人类胃粘膜的螺旋状、革兰阴性微需氧菌，现已被公认为慢性活动性胃炎和消化性溃疡的重要病因，并与肠型胃癌及胃MALT淋巴瘤的发生密切相关［1-3］。I型H.pylori菌株中含有一

8、个约40kb的cag致病岛（cytotoxinassociatedgenepathogenicityisland，cagPAI)。cag致病岛基因呈高密度分布并编码一个分泌转运系统（typeIVsecretionsystem,TFSS）。根癌农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens，A.tumefaciens）的V