rt-pcr／southern杂交法检测穹窿海马伞切割大鼠海马brn-4 mrna的表达变化

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1、RT-PCR／Southern杂交法检测穹窿海马伞切割大鼠海马Brn-4mRNA的表达变化作者：董传明秦建兵，金国华，王磊，朱蕙霞，田美玲【摘要】目的:探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4mRNA表达的差异。方法：42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割穹窿海马伞后1、3、7、14、21及28d组。取各组大鼠的海马组织，提取总RNA，采用RT-PCR/Southern杂交方法分析穹窿海马伞切割后海马内Brn-4mRNA的表达变化。结果：海马内Brn-4mRNA的表达量在切割后第3d开始升高，14d达到最高水平，随后下降，28d左右恢

2、复至正常水平。结论：切割穹窿海马伞后海马内Brn-4mRNA表达明显上调，可能与促进海马内移植的或自体的神经干细胞向神经元分化有关。【关键词】穹窿海马伞切割；海马；Brn-4；逆转录聚合酶链反应；Southern杂交；大鼠[Abstract]Objective:ToinvestigatethedifferenceofBrn-4mRNAexpressionbetweenthefimbriafornixtransectedratsandnormalones．Methods:42SDratswererandomlydividedinto7group

3、s，6ratsineachgroup．Onegroupservedasnormalcontrol11andtheothersservedasthe1st，3rd，7th，14th，21stand28thdaygroupafterfimbriafornixtransection,respectively.ThenhippocampiwereisolatedandtotalRNAwasextracted.RT-PCR/SouthernblotwasusedtodetectthechangeofBrn-4mRNAexpressioninhippoc

4、ampusafterfimbriafornixtransection.Results:TheexpressionlevelofBrn-4mRNAstartedtoincreaseonthe3rddayafterfimbriafornixtransection．Thepeakappearedonthe14thday，andthentheexpressiondecreasedslowlytopre-transectionlevelonthe28thday.Conclusion:TheprocessthattheexpressionofBrn-4m

5、RNAincreasessignificantlyafterfimbriafornixtransection,perhaps，mightberelatedtothetransplantedorendogenousneuralstemcellsdifferentiatingintoneuronsinhippocampus．[Keywords]Fimbriafornixtransection；Hippocampus；Brn-4；Reversetranscription-PCR；Southernblot;Rat11我们在近年的研究发现，将神经干细胞

6、分别移植到切割穹窿海马伞侧海马和正常侧海马中，神经干细胞在切割侧海马中更易于存活、迁移和向神经元分化[1，2]。体外诱导分化发现，切割穹窿海马伞侧的海马提取液促进神经干细胞向神经元分化的作用也明显强于正常侧海马提取液[3]。提示切割穹窿海马伞后，海马中某些诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的物质表达增强。新近我们还证实切割穹窿海马伞后也能促进切割侧海马中的自体神经干细胞向神经元分化。POU同源盒基因在中枢神经系统的发育过程中起重要作用，已证实其家族成员Brn-4作为重要的转录因子在胚胎纹状体神经干细胞向神经元分化过程中起调控作用[4]。本文使用

7、RT-PCR/Southern杂交方法观察了切割穹窿海马伞后不同时间点大鼠海马Brn-4mRNA表达量的变化，以期阐明Brn-4的表达变化与海马中植入的或自体的神经干细胞向神经元分化的相关性。1材料和方法1.1实验动物及分组SD大鼠42只(南通大学实验动物中心提供)，雌雄不拘，体重220～250g，随机分成7组，其中1组为正常对照组，其余6组分别为切割穹窿海马伞术后1、3、7、14、21和28d组，每组6只。1.2切割大鼠穹窿海马伞上述各组大鼠，经腹腔注射复合麻醉剂Chlorpent(0.2ml/10011g)麻醉后，固定于立体定位仪，暴露前

8、囟，确定前囟坐标A(矢状轴)、L(冠状轴)、V(垂直轴)，根据Paxinos图谱确定左右两侧穹窿海马伞的切割范围。先在颅骨上确定右侧两点即(1)A1=A-1.4、L