rt-pcr检测穹窿海马伞切割后大鼠海马内lhx8 mrna的表达变化

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1、RT-PCR检测穹窿海马伞切割后大鼠海马内Lhx8mRNA的表达变化作者：秦建兵，金国华，蒋媛媛，王磊，朱蕙霞，田美玲，张新化【摘要】　　目的：探讨切割穹隆海马伞大鼠海马与正常海马内Lhx8mRNA表达的差异。方法：36只SD大鼠随机分成6组，每组6只。1组为正常对照组，其余5组分别为切割穹窿海马伞后3、7、14、21和28d组。取各组大鼠的海马组织，提取总RNA，采用半定量RT-PCR法分析穹隆海马伞切割后海马内Lhx8mRNA的表达变化。结果：海马内Lhx8mRNA的表达量在切割后第3d开始升高，

2、7d时达到最高水平，以后逐渐下降，于28d时恢复至正常水平。结论：切割穹窿海马伞后海马中Lhx8mRNA表达的增高可能与神经干细胞向胆碱能神经元分化的再生机制有关。【关键词】穹窿海马伞切割海马Lhx8逆转录－聚合酶链反应大鼠　　[Abstract]Objective:ToobservethedifferenceofLhx8mRNAexpressioninhippocampibetweenthefimbriafornixtransectedratsandnormalones.Methods:36SDra

3、tswererandomlydividedinto6groups,6ratsineachgroup.Groupone8wasthecontrolgroup,andtheotherswere3rd,7th,14th,21stand28thdaygroupafterfimbriafornixtransected.ThenhippocampiwereisolatedandtotalRNAwasextracted.Semi-quantitativereversetranscriptase-polymerase

4、chainreaction(RT-PCR)analysiswasusedtodetecttheexpressionsofLhx8mRNAinhippocampi.Results:TheexpressionlevelofLhx8mRNAstartedtoincreasefromthe3rddayafterfimbriafornixtransection.Thepeakappearedonthe7thday,andtheexpressiondecreasedslowlytopre-transectionl

5、evelonthe28thday.Conclusion:TheincreaseofLhx8mRNAexpressionafterfimbriafornixtransectedmightberelatedtotheregenerationmechanismofdifferentiationofneuralstemcellsintocholinergicneuronsinhippocampus.　　[Keywords]Fimbriafornixtransection;Hippocampus;Lhx8;Re

6、versetranscription-polymerasechainreaction;Rat8　　移植于切割穹窿海马伞齿状回中的神经干细胞较正常侧海马齿状回中植入的神经干细胞更易于存活、迁移和向神经元分化[1,2]。体外实验也证实切割穹窿海马伞的海马提取液能明显促进神经干细胞向神经元和胆碱能分化[3]。这些结果提示切割穹窿海马伞后海马中某些能诱导神经干细胞存活、迁移和向神经元分化的信号物质表达增高。Lhx8是LIM同源盒基因家族中的一员，它主要选择性的表达在MGE(medialganglionicem

7、inence,MGE)区，对于胆碱能神经元的分化有至关重要的作用[4]。但迄今为止Lhx8基因在病理模型中的表达研究仍是空白。本研究旨在观察切割穹窿海马伞后大鼠海马内Lhx8mRNA表达是否增高，以推测Lhx8与切割穹窿海马伞海马促进移植入其中的神经干细胞向神经元或胆碱能神经元分化关系。　　1材料和方法　　1.1实验动物SD大鼠36只（南通大学实验动物中心提供），雌雄不拘，体重220～250g，随机分成6组，其中1组为正常对照组，其余5组分别为手术后3、7、14、21和28d组，每组6只。　　1.2切

8、割大鼠穹窿海马伞上述各手术组SD大鼠，经腹腔注射复合麻醉剂Chlorpent（0.2ml/1008g）麻醉后，固定于立体定位仪，暴露前囟，确定前囟坐标A(矢状轴)、L(冠状轴)、V(垂直轴)，根据Paxinos图谱确定左右两侧穹隆海马伞的切割范围。先在颅骨上确定右侧两点即：（1）A1=A－1.4、L1＝L－4和；（2）A2＝A－1.4、L2＝L－4；左侧两点即；（3）A3=A－1.4、L3＝L＋1和（4）A4＝A－1.4、L4＝L＋4，每点各钻一小孔，用