红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作时海马mglur5mrna表达变化的动态观察

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1、红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作时海马mGluR5mRNA表达变化的动态观察　　摘要:目的探讨红藻氨酸（KA，10mg・kg-1）诱导大鼠癫痫发作时海马代谢型谷氨酸受体5亚型（mGluR5）mRNA表达变化的病理特征.方法采用同位素S35dATP标记寡核苷酸探针原位杂交法检测大鼠癫痫发作前后海马mGluR5mRNA的表达变化，通过图像分析系统进行定量处理.同时观察大鼠行为学及脑电变化.结果KA注射后大鼠均出现严重边缘性惊厥，脑电图表现为阵发性癫痫样放电.正常大鼠海马中有丰富的mGluR5mRNA表达，以齿状回和CA1区表达较高.KA注射后海马各区mGlu

2、R5mRNA表达呈时间依赖性下调，CA1，CA3，CA4区表达在2h呈现出显著性差异（P<0.05），齿状回区表达在1h即有显著性差异（P<0.01），至72h各区表达均至最低.结论mGluR5在癫痫发作后表达下降可能有助于限制神经元网络的异常兴奋性，使细胞发挥自身保护性作用.　　Abstract:AIMToinvestigatetemporospatialchangesofmetabotropicglutamatereceptorsubtype5（mGluR5）mRNAexpressioninrathippocampusduringseizure

3、sinducedby　kainicacid（KA）.METHODSUsinginsituhybridizationGluR5mRNAexpressionined.Therelativenum-berofhybridizationsignalsageanalysissystems.Theelectroencephalogram（EEG）andbehaviourchangesoftheratsultaneouslyobserved.RESULTSAllratsofKA-injectedgroupexhibitedseverelimbiccon-vulsions.T

4、heEEGrecordingsalsoshoGluR5mRNApusidallayerofCA1.AfterKAin-jection，mGluR5mRNAexpressionexhibitedtime-dependentdoGluR5mRNAarkedlydoodifiesmGluR5geneexpression，ayhelptolimitabnormalexcitabilityofneuronalGluRs）的发现是谷氨酸能突触研究的一项重要进展.到目前为止，已经克隆出8种mGluRs亚型（mGluR1-8），依据序列的同源性、信号转导机制以及激动剂的选择性

5、，可以将其分为3组，Ⅰ组包括mGluR1和mGluR5，Ⅱ组包括mGluR2和mGluR3，Ⅲ组包括mGluR4，6，7，8.Ⅰ组受体与磷脂酶C（PLC）耦联，激活后促使磷脂酰肌醇（PI）水解，产生三磷酸肌醇（IP3）和二酰基甘油（DAG），IP3使内质网中Ca2+释放到胞质中，导致胞质中Ca2+浓度增高，DAG则可激活蛋白激酶C（PKC），增强NMDA受体介导的兴奋毒性［1］.研究表明，Ⅰ组受体激动剂可以产生致痫作用，其拮抗剂可阻断多种实验性癫痫的发生，提示Ⅰ组受体在癫痫活动中发挥了重要作用［2，3］.以往多用药理学方法研究mGluRs的作用，而有关癫痫发作

6、期间特定脑区mGluRsmRNA表达水平的动态观察研究较少.为此，我们采用红藻氨酸（KA）诱导大鼠癫痫发作模型，动态观察致痫前后海马Ⅰ组mGluR5亚型mRNA的表达变化，同时观察大鼠行为学和脑电图（EEG）表现，以期从分子水平进一步探讨癫痫的发生机制.　　1材料和方法　　1.1材料雄性SD大鼠34只，体质量200～250g，随机分为对照组、KA注射后1，2，4，8，24和72h等7个实验组，每组4只大鼠，共28只.KA（Sig-ma公司）腹腔注射10mg・kg-1，对照组生理盐水腹腔注射.6只大鼠用于描记EEG.所有大鼠均观察行为学变化.　　1

7、.2方法①EEG描记及组织切片制作:用原方法［4］;②探针标记:mGluR5寡核苷酸探针序列［5］为5’-GGAGCGGAAGGAAGAAGATCCATCTACA-CAGCGTACCAAACCTTC-3’（由上海生物工程有限公司合成）.运用3’-末端标记法标记探针.将5μLS35dATP，2μL10×CobaltReactionBuffer，4μL（20ng・μL-1）mGluR5寡核苷酸探针、1μL末端转移酶、8μL灭菌水混合后，37℃水浴2.5h.选用Nensorb20TM核酸纯化柱纯化探针.探针标记效率为2.5GBq・L-1.

8、③原位杂交:杂交前取出脑片，风干.40