癫痫大鼠海马mirnas表达谱和mir-34a与-9在癫痫发生中动态变化的研究

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1、分类号VDC博士学位论文密级癫痫大鼠海马miRNAs表达谱和miR-34a与．9在癫痫发生中动态变化的研究MicroRNAexpressionprofileinepilepticrathippocampusanddynamicchangesOI一·一-●-●●miR-34aand--9expressionpatterninepileptogenesis作，者姓名：胡凯学科专业：神经病学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：肖波教授答辩委员会主席中南大学二。一二年五月原创性声明IIllIIIIUIllHIHIIIIIIIIIIY2197855本人声明，所呈交的学位论文是本

2、人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：盘堑日期：丝年三月竺日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本

3、学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名(豳垃导师签名塾日期：兰年三月鲨日博士学位论文摘要第一部分癫痫大鼠海马miRNA表达谱、实时荧光定量PCR验证差异表达miRNAs、生物信息学分析差异表达miRNAs目的：通过应用miRNA微阵列芯片技术，检测和分析颞叶癫痫大鼠海马脑组织miRNA表达谱，筛选具有差异表达的miRNAs；通过荧光定量PCR技术验证具有差异表达的miRNAs，针对具有差异表达的miRNAs，检测其在外周血的表达、与脑组织的表达进行对比；运用生物信息学方法，预测差异表达miRNAs的靶基因、基因聚类项目、

4、以及生物学通路，为探讨在颞叶癫痫状态下miRNAs对中枢神经系统的损伤机制奠定基础。方法：1．颞叶癫痫大鼠动物模型：通过氯化锂．匹罗卡品致痫、以及随后视频观察、脑电图监测，建立颞叶癫痫大鼠动物模型。2．miRNA微阵列芯片检测、筛选差异表达miRNAs：提取癫痫大鼠脑组织海马区miRNAs，采用miRNA微阵列芯片技术，检测和分析颞叶癫痫大鼠海马区脑组织的miRNA表达谱。3．实时荧光定量PCR验证具有差异表达miRNAs：选取miRNA芯片检测具有显著差异表达的miRNAs，采用实时荧光定量PCR技博士学位论文中文摘要术，验证其在海马区脑组织中的表达，并对上述mi

5、RNAs在大鼠外周血中的表达进行检测，对比脑组织和外周血中miRNAs的表达差异。4．通过生物信息学分析，预测靶基因、分析基因聚类、预测富集生物学通路：利用TargetScan预测差异表达miRNAs的靶基因；针对差异表达miRNAs的靶基因进行基因聚类分析；应用KEGG数据库预测可能富集的生物学信号通路。结果：1．癫痫大鼠海马区脑组织中差异表达的miRNAs：应用miRNA微阵列芯片技术，在癫痫大鼠海马区脑组织中检测到上调miRNAs基因9个，下调miRNAs基因15个。2．实时荧光定量PCR验证具有差异表达的miRNAs：选择具有上调改变的3个miRNA基因(m

6、iR．146a、miR-210、miR．27a)和具有下调改变的2个miRNA基因(miR．135b、miR．33)，实时荧光定量PCR结果显示：miR-146a、miR-210、miR-27a表达上调，miR．135b、miR．33表达下调，与芯片结果相一致；但上述miRNAs在外周血中并不具有显著的差异表达，不能达到替代海马区脑组织中具有显著差异表达miRNAs的作用。3．通过应用生物信息学分析miRNA芯片检测、具有差异表达的miRNAs：通过TargetScan靶基因预测软件，得到了差异表达miRNAs的靶基因：利用基因聚类(GeneOntology)对靶基

7、因进行了分析，得到具有显著统计学意义的基因聚类项目；应用KEGG数据库对靶基博士学位论文中文摘要因进行分析，得到了具有显著统计学意义、可能富集的生物学信号通路。结论：1．建立了颞叶癫痫大鼠动物模型，获得了颞叶癫痫大鼠海马区脑组织中的miRNA表达谱。2．通过芯片检测得到了颞叶癫痫状态下海马区脑组织中可能具有差异表达的24个miRNA靶基因，其中9个miRNA靶基因具有上调改变、15个miRNA靶基因具有下调改变。3．验证了具有差异表达的miRNA靶基因：miR-146a、miR-210、miR．27a、miR-135b、miR-33；但未发现上述miRNA靶基因