cox2反义核酸对喉癌恶性生物学行为的抑制作用

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1、COX2反义核酸对喉癌恶性生物学行为的抑制作用作者：姚小宝，王晓侠，张少强，闫利英，朱宏亮【摘要】目的探讨环氧合酶2(COX2)反义核酸对喉癌细胞恶性表型的抑制作用。方法采用脂质体介导方法，分别构建转染COX2反义真核表达载体和空载体的喉癌细胞系Hep2AS和Hep2P细胞。RTPCR及Westernblot分析转染细胞COX2mRNA及蛋白表达水平；MTT比色实验、Boyden侵袭小室法和裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞的体外增殖速度、体外侵袭力和体内成瘤性。结果RTPCR结果显示，Hep2AS细胞COX2/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mR

2、NA比值(0.65)明显低于Hep2(0.92)和Hep2P细胞(0.90)；Westernblot结果提示Hep2AS细胞COX2/βactin比值(0.29)明显低于Hep2细胞(0.46)和Hep2P细胞(0.44)；MTT比色实验显示Hep2AS细胞较Hep2P、Hep2细胞生长速度减慢，三者倍增时间分别为3.6d、2.9d和2.9d；体外侵袭实验结果表明，Hep2AS侵袭细胞数(18.20±5.97)显著低于Hep2细胞(45.40±8.12)及Hep2P细胞(44.10±6.47)(P<0.01)。裸鼠成瘤实验

3、中，Hep2P、Hep2细胞接种裸鼠后第5天肿瘤长出，而Hep2AS细胞第7天肿瘤长出；28d后Hep2AS细胞接种组瘤体体积[(764.85±129.61)mm3]低于Hep2细胞[(1181.73±360.83)mm3]和Hep2P细胞接种组[(1065.21±12237.46)mm3]，有显著性差异(P<0.01)。结论喉癌细胞中COX2过表达与细胞的恶性表型相关，反义核酸技术抑制COX2表达可以逆转喉癌细胞的恶性表型。【关键词】喉癌；核酸；环氧合酶2ABSTRACT:ObjectiveToexploretheeffectofan

4、tisensenucleicacidofcyclooxygenase2(COX2)inmalignantphenotypeoflaryngealcancercellsandthemechanismofCOX2incarcinogenesisoflaryngealcancer.MethodsUsingLipofectamineTM2000reagent,theCOX2highlyexpressedinhumanlaryngealcancercelllineHep2wastransfectedwithantisenseeukaryoticexpression

5、vectorpcDNA3.1/hCOX2(-)andcontrolplasmidpcDNA3.1(namedasHep2ASandHep2Pcells,respectively).SemiquantitativeRTPCRandWesternblotwereusedtotestifythemRNAandproteinlevelinthetransfectedcells.MTTassay,Boydenchamberandtumorimplantationexperimentwereusedtodetecttheproliferation,invasiona

6、ndtumorigenesisofthetransfectedcellsinvitroandinvivo.ResultsRTPCRanalysisindicatedthattheratioofCOX2mRNAtoGAPDHmRNAinHep2AScells(0.65)wassignificantlylowerthanthatinHep2(0.92)andHep2Pcells(0.90)(P<0.01).Westernblotshowedthattheratioof12COX2proteintoβactinproteininHep2AS(0.

7、29)wassignificantlylowerthanthatinHep2(0.46)andHep2P(0.44)(P<0.01).MTTassaysuggestedthattheHep2AScellsproliferatedmoreslowlythantheHep2andHep2Pcellswithdoubletimeof3.6,2.9and2.9d,respectively.BoydenchamberassayrevealedthatthecellnumberoftheHep2AScells(18.20±5.97)th