不同炮制方法对附子中3种双酯型生物碱含量的影响

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1、不同炮制方法对附子中3种双酯型生物碱含量的影响【摘要】目的研究不同炮制方法对附子中3种双酯型生物碱含量的影响。方法分别采用江西建昌帮煨制法、樟树帮法与《中国药典》方法制备附子炮制品，以高效液相色谱(HPLC)方法测定其中新乌头碱、乌头碱与次乌头碱含量。结果不同的附子炮制品中新乌头碱、乌头碱与次乌头碱的平均质量分数(ωB)分别为：建昌帮煨制法：(2.11±0.28)μg·g-1，(6.70±0.19)μg·g-1，(11.24±0.93)μg·g-1;樟树帮法：(2.35±0.37)μg·g-1，(3.21±0.89)μg·g-1

2、，(8.05±0.90)μg·g-1;中国药典法：(1.41±0.16)μg·g-1，0，(1.64±0.21)μg·g-1。结论建昌帮煨制附子中3种双酯型生物碱含量的总量高于其他两种方法，为研究建昌帮炮制技术提供了实验依据。【关键词】中药炮制;建昌帮;附子;双酯型生物碱;高效液相色谱　附子为毛莨科植物乌头Aconitumcarmichaeli7Debx.的子根加工品，药性辛、热，有大毒，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛的功效[1]，临床主要以炮制品应用为主。由于附子炮制方法甚多，工艺也不统一，由此造成附子饮片质量良莠不齐，严重

3、影响了附子临床应用的安全与有效。本文采用江西建昌帮煨制法、樟树帮法与《中国药典》方法等3种方法炮制附子，并研究比较了不同附子炮制品中3种双酯型生物碱的含量差异。　　1仪器与材料　　1.1仪器岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪(岛津公司);N2000色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所);Tu-1901型紫外可见分光光度计(北京普析);METTLER-TOLEDDAB265-S型电子分析天平(瑞士)。　　1.2材料附子药材购自江油中坝附子科技发展有限公司，经本校李秀英副教授鉴定为毛莨科植物乌头Aconitumcarmich

4、aeli的子根加工品;辅料：甘草、皂角由本校标本陈列室提供，生姜、黑豆、薯粉购自食品综合超市;对照品：新乌头碱(110799-200404)、乌头碱(110720-200410)、次乌头碱(110798-200404)，购自中国药品生物制品检定所;试剂除HPLC用乙腈为色谱纯外，其他均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1附子炮制品的制备　　2.1.17建昌帮煨附子取盐附子，洗净，用清水浸漂至盐分去尽后，取出，晾干。然后均匀平铺于细糠灰中，上面覆盖一层净生姜片，生姜片上平覆盖2张草纸，纸上在铺一层净细糠灰，灰上平铺少量稻草、干糠壳

5、。然后再于四角点火引燃，待糠烬灰冷，取出附子，再蒸8～10h，取出，日摊夜闷至半干，切纵薄片，晾晒干。　　2.1.2药典法黑顺片取泥附子洗净，浸入食用胆巴水中数日，连同浸液煮至透心，捞出，水漂，纵切成厚约0.5cm的片，再用水浸漂，用调色液使附子染成浓茶色，取出，蒸到出现油面、光泽后，烘至半干，再晒干或继续烘干。　　2.1.3樟树帮黑顺附取盐附子，削去粗皮，用米泔水浸渍后再用清水浸漂，然后加水、甘草、黑豆、皂角同放入锅内，用文火煮至中央无白心为度。捞起拣尽辅料，晒至七成干，放入缸内闷润2d，切成4分厚直片，加薯粉及少许清水，拌匀

6、，置木甑内蒸4h，放凉，使附片表面“结面”，用文火烘干。　　2.2溶液的制备　　2.2.1混合对照品溶液的制备精密称取新乌头碱、乌头碱、次乌头碱对照品适量，加甲醇制成每毫升分别含16，25.6，32.1μg的混合对照品溶液，备用。　　2.2.2供试品溶液的制备称取生附子粗粉约0.17g，盐附子粗粉约2g及附子炮制品粗粉约3g，精密称量，分别置150ml具塞锥形瓶中，加入浓氨水3ml润湿0.5h，加入乙醚100ml密塞，放置过夜，次日超声15min，过滤，再以30ml乙醚分次洗涤滤渣过滤，合并滤液和洗液，40℃水浴挥干，甲醇溶解残

7、渣并定容至2ml，摇匀，临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，备用。　　2.3色谱条件色谱柱为VenusilXBP-C18柱(5μm，4.6mm×250mm);流动相为乙腈-20mmol·L-1NaH2PO4(磷酸调pH4.0)(50:50)(内含10mmol·L-1十二烷基硫酸钠);流速1.0ml/min;检测波长235nm;柱温35℃。精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液10μl，供试品溶液各20μl进行色谱分析，记录色谱图。结果见图1。a新乌头碱、乌头碱、次乌头碱对照品b生附子c盐附子d建昌帮煨附子e樟树帮黑顺附f

8、中国药典黑顺片图1高效液相色谱图　　2.4线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液1，2，4，6，8，10ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μl，依次注入液相色谱仪，测定。以进样量X(μg)对峰面积A进行线性回归，回归方程分别为：新乌头