不同炮制方法制白附子中β-谷甾醇含量比较

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1、不同炮制方法制白附子中β-谷甾醇含量比较【摘要】目的比较不同炮制方法中β-谷甾醇(β-sitosterol)含量变化。方法薄层扫描法。结果β-谷甾醇含量：药典法(2000年版)0．0199%<河南法(河南省中药炮制规范)0．0261%<白矾水泡法(即冷浸法)0．0365%<白矾水加热煮法（即热浸法）0．0453%<生品(未炮制品)0．0600%。结论不同炮制方法对白附子中β-谷甾醇含量有一定影响。【关键词】白附子；β-谷甾醇；薄层扫描白附子为天南星科植物独角莲TyphoniumgiganteumEngl.的干燥块茎。辛，温，

2、有毒。归胃、肝经。具有祛风痰、定惊搐、解毒散结止痛的功能。中医临床多用炮制品入药，用于中风痰壅、口眼歪斜、偏正头痛、喉痹咽痛、破伤风;外治痰核、毒蛇咬伤等[１]。有报道白附子具有抗炎[2]、镇静、抗惊厥[3]、祛斑美容[4]等作用。药效学证明白附子各种炮制品也具有相似的抗炎作用[2]及镇静、抗惊厥、镇痛[3]作用。研究表明白附子中含有胆碱、油酸、β-谷甾醇[5]、天师酸、尿嘧啶、β-谷甾醇-3-O-葡萄糖苷等多种成分[6]。其中β-谷甾醇具有降低血胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等作用，临床可治疗慢性气管炎[7]7，因此是白附子的活

3、性成分之一，炮制对β-谷甾醇含量有一定影响。本文对药典法与河南法进行改进,设计新的方法。新方法具有省工、省时、省燃料的优点，口尝微有麻舌感，符合药典对白附子炮制的要求，并用薄层扫描法测定白附子药典法(2000年版)、河南法(河南省中药炮制规范)、新法1(即冷浸法)、新法2（即热浸法）以及生品中β-谷甾醇含量，进一步比较不同炮制方法对白附子中β-谷甾醇含量的影响，方法和结果报告如下。1药材与仪器1．1仪器CS-9301双波长薄层扫描仪（日本岛津）、定量点样毛细管（sigma）、索氏提取器、蒸发皿150ml蒸馏烧瓶。1．2试剂β

4、-谷甾醇对照品（河南中医学院药物化学冯卫生教授鉴定提供，含量98．1%）、硅胶G(青岛海洋化工厂)；其它化学试剂均为分析纯。1．3药材白附子药材购自河南禹州地区，经河南中医学院鉴定教研室陈随清教授鉴定为天南星科植物独角莲（TyphoniumgiganteumEngl）的干燥块茎。1．4白附子样品炮制:分别取净白附子200g，按照药典法、河南法、新法1和新法2炮制加工，制备样品。2实验条件的选择2．1薄层板的制备7按1份硅胶G加入3份0．6%的CMC-Na溶液，研磨均匀，用手动涂铺器铺板，厚度为0．5mm，晾干后105℃活化3

5、0min，置干燥箱中保存备用。2．2展开剂与显色剂展开剂：石油醚-乙酸乙酯(8∶3)；显色剂：磷钼酸-乙醇（5%）。2．3最大吸收波长（λmax）选择将显色后的薄层板放入薄层扫描仪样品台上，采用反射法单波长锯齿扫描，狭缝1．25mm×1．25mm，灵敏度×1，纸速20mm/min，扫描速度20mm/min,测得β-谷甾醇最大吸收波长为670nm，而在390nm有最低吸收，因此确定λS＝670nm,λR=390nm为波长和参比波长，扫描幅度X=9mm，Y=20mmSX=2。3方法与结果3．1不同炮制品中β-谷甾醇定性比较[8]

6、精密吸取各供试品溶液1μl，点于同一硅胶G薄层板，中间分别点1μl、4μl对照品溶液（1．035mg/ml），按上述层析条件展开、显色、结果斑点显蓝色且分离良好,计算Rf值为0．575。结果证明不同炮制品种均含有β-谷甾醇。见图1。3．2标准曲线的绘制[5]精密称取标准品2mg置2ml的容量瓶中，用氯仿-甲醇(2:1)稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（1．035mg/ml）。分别精密吸取此对照品溶液1、2、3、4、57μl点于同一硅胶G薄层板上，然后放入层析缸中，用石油醚-乙酸乙酯(8:3)展开系统展开，磷钼酸-乙醇（5%）

7、显色。100℃烘烤5min,得到蓝色斑点，迅速进行薄层扫描，测定其积分峰面积值见表1,2。以对照品浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得标准曲线，积分峰面积与浓度呈良好的线性关系，回归方程为Y=5486．5X+1885．5r=0．999。3．3精密度试验精密吸取β-谷甾醇对照品溶液（1．035mg/ml）1μl重复点样5次，展开，显色，测定，β-谷甾醇各斑点峰面积积分值RSD＝0．29%,精密度良好，结果见表3。3．4稳定性试验精密吸取热浸法样品提取溶液1μl，β-谷甾醇标准品溶液(1．035mg/ml)1μ、3μl点于硅胶

8、G薄层板上，展开后显色,扫描测定,每隔25min测定一次，结果表明在实验时间内其稳定性良好，峰面积积分值见表4。3．5加样回收率试验取药典法炮制之白附子粉末（40目）约1．7g共7份，精密称定，分别装于定量滤纸筒,置于索氏提取器中，其中1份不加对照品作为随行对照，其余6份分别加入0．178