ceb代谢产物对ｔ淋巴细胞的激活作用

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1、CEB代谢产物对Ｔ淋巴细胞的激活作用【摘要】目的　　探讨内生菌（CEB）代谢产物提高免疫功能的生物效应。方法　　取CEB纯培养代谢产物用小白鼠进行体内试验，并设培养基、免疫抑制和生理盐水为对照。取小鼠血涂片，进行Ｔ淋巴细胞酸性酯酶染色，分别检测总Ｔ淋巴细胞、酸性酯酶阳性大颗粒及小颗粒Ｔ淋巴细胞，进行统计学处理。结果　　CEB代谢产物组总Ｔ淋巴细胞、大颗粒、小颗粒Ｔ淋巴细胞分别为54.80%、38.20%、16.90%；显著高于对照组（41.90%、27.80%、14.10%，P<0.01～0.05）。结论　　支持CEB培养代谢产物作为生物免疫激活剂，能促进淋巴细胞

2、增值，提高免疫功能的理论。【关键词】内生菌T淋巴细胞酸性酯酶有丝分裂因子　　　　中国科学院武汉植物研究所张政铨、聂开印两位教授在世界上首次发现单子叶植物百合组织中与其互利共生的内生菌（CellEndophyteBacteriaＣＥＢ）［1］，其代谢产物富含天然维生素Ｅ、天然维生素Ｃ、维生素Ｂ６、多糖、谷胱甘肽、类SOD及生物碱等主要抗氧化物活性成分［2］。这一重大发现引起了国内外学者的广泛关注。为了弄清它们对Ｔ淋巴细胞的激活作用以及发挥这种作用的内在联系，我们设计并进行以下研究，企图探讨CEB代谢产物作为一种免疫增强剂的可能性，现将研究方法与结果整理报告如下。51　　材

3、料与方法1.1　　实验材料　　CEB代谢产物：系从CEB纯培养提取，由中国科学院武汉植物研究所内生菌研究室提供。内生菌生长液体培养基对照（以下简称培养基）：提供单位同上。环磷酰胺：200mg/ml。实验动物：昆明小白鼠，一级实验动物。1.2　　实验方法1.2.1　　对小鼠Ｔ细胞激活作用的观察　　取20～24g小鼠40只，雄雌廉用，随机分成4组：1组为内生菌0.2ml/只；2组为培养基0.2ml/只；3组为环磷酰胺10mg/kg；4组为生理盐水0.2ml/只，各组均为每日腹腔注射1次,共7次,第8日摘眼球放血，涂片、干燥进行Ｔ细胞酸性醋酸酯酶染色［3］（染色育液：将4%付

4、品红加入4%亚硝酸钠及9倍体积的1/15MPBS,pH7.6混匀,再加入α醋酸奈酯，pH5.2混匀备用），育染3h后取出流水冲洗，干燥后甲基绿染色1min。酸性醋酸酯酶染色阳性淋巴细胞为Ｔ淋巴细胞；并在油镜下计数紫红色大颗粒及小颗粒淋巴细胞，分别记录百分率。1.2.2　　统计学处理　　将资料分类整理后录入Excel表格进行统计。计数资料进行χ52检验，计量资料进行t检验。以Ｐ<0.05为差异有显著性。2　　结果CEB培养的代谢产物注射小鼠后，刺激小鼠的免疫系统致总Ｔ淋巴细胞显著增高，与生理盐水对照组比较，差异有非常显著性（P<0.01）；培养基对照组未见Ｔ

5、淋巴细胞总数增多（P>0.05），可见总Ｔ淋细胞的激活与培养基无关。第三组为环磷酰胺即免疫抑制组，Ｔ淋巴细胞明显低于生理盐水对照组（P<0.05），提示本组实验设计灵敏可靠，见表1。表1　　对小鼠总Ｔ淋巴细胞活化的影响　注：表中统计学处理为各组与第四组比较　　　　一般认为在Ｔ淋巴细胞酯酶染色中，大颗粒阳性细胞为Ｔ辅助型淋巴细胞，具有辅助Ｂ淋巴细胞及Ｔ抑制细胞的功能。在小鼠血片中表现为Ｔ细胞增生活跃，数量明显增加，颗粒粗大；第二组（培养基组）与生理盐水对照组其酯酶阳性大颗粒细胞数量基本一致（P>0.05）；第三组（环磷酰胺）则明显被抑制（P<0.0

6、1）。见表2。表2　　对小鼠酸性醋酸酯酶阳性大颗粒型细胞的影响注：表中统计学处理为各组与第四组比较5　　　　一般认为酸性醋酸酯酶染色阳性中小颗粒型Ｔ细胞为具有免疫抑制功能的Ｔ细胞亚群。本研究（表3）证明，CEB代谢产物不仅能刺激辅助型Ｔ细胞活化（表2），亦能使抑制型Ｔ细胞活化，与对照组比较差异有显著性（P<0.05），提示内生菌作为一种生物免疫刺激剂或Ｔ细胞激活剂的作用，可能为非特异性或非选择性（详见表3）。表3　　对小鼠酸性醋酸酯酶阳性小颗粒型细胞的影响注：表中统计学处理为各组与第四组比较3　　讨论S淋巴细胞是活动静止的细胞，但是当其受到适当刺激而活化时，它将发

7、生急剧的改变。这些改变常按一个特征性的时间顺序进行，所以这些变化中的任何一个环节都能作为检测活化的指标。通常应用的试验是测定：（1）淋巴因子的产生；（2）淋巴细胞的增殖；（3）抗体的合成；（4）细胞毒性［4］。本研究采用的是检测淋巴细胞增殖试验。淋巴细胞依靠特殊的表面受体首先接触免疫激活剂（抗原），这些受体是按照与抗原特异地相互作用而设计的。当抗原结合到特殊的受体即导致免疫活性细胞的活化，并以最大的效能和强度去执行免疫效应功能。在体内或体外把抗原引入到淋巴细胞群中，将引起能识别抗原的那些细胞克隆活化。由抗原诱导的活化是非常特异的，一个特定