六月青含药血清对hepg2.2.15细胞　hbv cccdna的抑制作用

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1、六月青含药血清对HepG2.2.15细胞　HBVcccDNA的抑制作用作者：黄权芳，林兴，黄仁彬，张士军【摘要】目的观察六月青(Liuyueqing，LYQ)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法采用血清药理学方法，在HBV的体外细胞培养系统中(2.2.15细胞)进行LYQ抗HBVcccDNA作用观察。结果LYQ含药血清在HepG2.2.15细胞培养中可有效地抑制细胞HBVcccDNA的复制，其作用呈明显的量效和时效反应关系。结论LYQ在体外有明显的抑制乙肝病毒的作用。【关键词】六月青;乙型肝炎病毒;HepG2.2.15细胞;HBVcccDNA

2、　Abstract：ObjectiveTostudytheanti-HBVactivityofLiuyueqing(LYQ)invitro.MethodsTheHBVinvitrocellculturesystem(HepG2.2.15cell)wasusedforexaminingtheanti-HBVactivityofLYQwithSerum-pharmacology.ResultsTheserumcontainingLYQcoulddecreasetheHBVDNAlevelinHepG2.2.15cells,anditsinhibito

3、ryeffectsweredose-andtime-dependent.ConclusionLYQcaninhibitHBVDNAinvitrosignificantly.7　　Keywords：Liuyueqing;HBV;HepG2.2.15cell;HBVcccDNA　　六月青(Liuyueqing，LYQ)系爵床科(Acanthaceae)植物肖鸡笼(顶花马兰)Taraphochlamysaffinis(Griff)Bremekhu[Strobilanthesaffinis(Griff)Y.C.Tang]的干燥地上部分[1]。本课题组前期

4、研究发现，六月青含药血清对HepG2.2.15细胞系HBsAg-HBeAg有明显抑制作用[2]，其总皂苷对HBV-DNA的复制有显著的抑制作用[3]。本实验研究六月青含药血清对HepG2.2.15细胞HBVcccDNA的作用，进一步探讨六月青抗乙肝作用机制。　　1材料与仪器　　1.1药物六月青(Liuyueqing，LYQ)采于广西灵山，由广西中医学院一附院黄权芳中药师鉴定，其水提物由广西医科大学药理学教研室和广西医学科学实验中心提取。　　1.2动物Wistar大鼠，雌雄各半，体质量(250±10)g，实验动物使用许可证号：SYKG桂2003-0

5、005;实验动物生产许可证号：SCXKG桂2003-0003;由广西医科大学实验动物中心提供。　　1.3细胞株HepG2.2.15细胞株(北京医科大学第一附属医院病毒研究所)，本室自行传代，定期用G418筛选。7　　1.4试剂阿昔洛韦(Aciclovir，ACV湖南迪诺制药有限公司医药工业研究所产品，批号:20070518);RPMI1640培养基(美国Gibco公司，Cat　No.21202-016);胎牛血清(美国Gibco公司，CatNo.21607-042);G418(美国Sigma公司，CatNo.228527-72);QIAampDN

6、AMiniKit试剂盒(Qiagen公司，No.127141405);HBVDNA荧光定量PCR试剂盒(深圳匹基生物工程股份有限公司，批号：20070613);SYBRGreenPCRKit(Qiagen公司，No.127144035)。　　1.5仪器iCyclerFQ实时荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司);CO2孵箱(美国Thermo　Forma公司，Model311)。　　2方法　　2.1LYQ含药血清的制备3月龄Wistar大鼠50只，随机分为5组，每组10只。①空白对照组：等量的生理盐水;②阳性对照组：ACV0.1mg·kg·d-

7、1;③LYQH组：6.6g·kg·d-1;④LYQM组：3.3g·kg·d-1;⑤LYQL组：1.7g·kg·d-1。各组动物在同样条件下饲养，均以2次/d，早晚各1次空腹灌胃，连续给药7d。于末次灌胃(灌胃前禁食不禁水12h)后2h，乙醚吸入麻醉，腹主动脉抽血，低速离心分离血清，并将每组动物的血清混合。经56℃30min灭活处理，经0.45μm的微孔滤膜，再经0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，置-20℃7冰箱保存备用。　　2.2引物合成P1：ACCGTGTGCACTTCGCTFC，P2：AGTAGGACATGAACAAGAGATGATTAGG;另

8、一对引物，其正义引物与反义引物均位于负链缺口下游双链区域，可同时扩增：rcDNA和cccDNA。P3：GCCTCCAAGCTGTGCCT