六月青含药血清对hepg2.2.15细胞系hbsag与hbeag表达的影响论文

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1、六月青含药血清对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达的影响论文林兴黄权芳张士军刘曦黄仁彬【摘要】目的观察六月青（Liuyueqing，LYQ）含药血清的体外抗乙型肝炎病毒的作用。方法以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用，采用酶联免疫法（ELISA法）检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg、HBeAg的滴度。结果LYQ含药血清对HepG2.2.15细胞50%生长抑制率的给药剂量为11.56g·(kg·d)-1；而对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg50%生长抑制率的给药剂量为0.178g·(k

2、g·d)-1，其治疗指数（TI）为64.94；另外，LYQ含药血清对HBeAg抑制作用不明显。结论LYQ含药血清在体外有显著的抗HBV的作用，且毒性较低。【关键词】六月青含药血清；HepG2.2.15细胞；HBsAg；HBeAgAbstract：ObjectiveToobservetheeffectoftheserumcontainingLiuyueqing(LYQ)ontheexpressionofHBsAgandHBeAginHepG2.2.15cells.MethodsThetoxicityoftheserumcontainingLYQon

3、HepG2.2.15cellseansofMTT.TheinhibitoryeffectsoftheserumcontainingLYQontheexcreationofHBsAgandHBeAginHePG2.2.15cellsethodofenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).ResultsThedosecontainingLYQcouldinhibit50%HepG2.2.15cellscontainingLYQcouldinhibit50%HBsAgentindex(TI)onHBsAgcontain

4、ingLYQonHBeAgcontainingLYQcaninhibitHBVsignificantlyinvitro，anditisalocontainingLiuyueqing；HepG2.2.15cell；HBsAg；HBeAg六月青（Liuyueqing，LYQ）系爵床科（Acanthaceae）植物肖鸡笼（顶花马兰）Taraphochlamysaffinis(Griff)Bremekhu(Strobilanthesaffinis(Griff)Y.C.Tang)的干燥地上部分［1］。六月青是复方六月雪（CLYX）主要成分之一.freela

5、公司，批号108321-42）。2方法2.1LYQ含药血清的制备3月龄TT法）取HepG2.2.15细胞1瓶，用胰酶消化后制备成单细胞悬液，计数后调整细胞浓度至2×104cell·ml-1，加入96孔培养板中（每孔100μl），置CO2孵箱（37℃，5%CO2）中培养24h后，细胞贴壁且生长良好，吸除全部培养液，加入上述含药血清100μl，每个浓度设6个复孔。连续培养72h，培养结束前4h，每孔加入MTT10μl，于CO2孵箱中继续培养。4h后小心吸弃上清液后，每孔加DMSO100μl，微量振荡器振荡5min，使结晶紫完全溶解。自动酶标仪（检测波

6、长570nm，参考波长630nm）读取各孔OD值，记录结果。按Reed-Muench法计算半数细胞毒浓度（TC50）和最大无毒浓度（TC0）。2.3ELISA法定量检测HBsAg和HBeAg将2×104cell·ml-1的细胞悬液加24孔细胞培养板，每孔0.5ml，置CO2孵箱（37℃5%CO2）中培养24h后，细胞贴壁且生长良好，除去全部培养液，根据细胞毒性试验结果，以1.7g·(kg·d)-1给药剂量组的含药血清为第1个浓度，再用完全培养液系列2倍稀释成4个浓度的应用液，即相当于5个给药剂量级别：1.7，0.85，0.425，0.213，0.

7、107g·(kg·d)-1的含药血清，每孔加入上述各级别的含药血清应用液0.5ml，每个浓度设3个复孔。连续培养72h后，分别吸出上清液置于1.5ml灭菌Eppendorf管中，-20℃保存，统一待检。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测，结果以抑制率表示，药物对抗原的抑制百分率（%）=［1-实验孔抗原OD值/对照孔抗原OD值］×100%，并按Reed-Muench法计算半数抑制浓度(IC50)。2.4药效评价一般用治疗指数（TI）来评价药物的临床应用前景。TI=TC50/IC50，TI2为药物有效低毒，12.5统计学处理数据以±s表示，统计学

8、采用SPSS11.5软件，配对t检验。3结果3.1药物对细胞的毒性实验各含药血清加于单层HepG2.2.15细胞上，连续培养72h后，观