大孔树脂分离纯化黄连总生物碱型号的筛选

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1、大孔树脂分离纯化黄连总生物碱型号的筛选【摘要】【目的】从众多的树脂型号中筛选出分离纯化黄连总生物碱效果较好的一种。【方法】运用AB8、HP20、LD605、ADS3、ADS5、D151、DA201、XAD7、NKA99种树脂，以黄连总生物碱的吸附率和解吸率为指标进行初筛，并以盐酸小檗碱的解吸率为指标，进一步的筛选。【结果】9种树脂中，ADS3树脂的吸附和解吸能力均较强，总生物碱的吸附率达到9726%，解吸率达到8482%。盐酸小檗碱的解吸量达到9311mg。【结论】ADS3树脂对总生物碱及

2、盐酸小檗碱的吸附和解吸性能都较好，可用于黄连总生物碱的分离纯化。【关键词】黄连/分离和提纯;总生物碱/分析;盐酸小檗碱/分析;大孔树脂黄连是毛莨科植物黄连的根茎，有效成分主要是生物碱，其中小檗碱的含量最高，可达10%左右，而且以盐酸盐的状态存在于黄连中[1]。黄连中的生物碱大多是季铵型生物碱，在水中溶解度大，有一定的极性[1]。在运用大孔树脂分离纯化中药有效成分时，树脂的极性和所含的官能团对化合物的吸附能力有很大的影响。因此，对于中药有效成分或有效部位的纯化，树脂型号的选择非常重要。　　根据已有的报道，目前常

3、用于生物碱分离纯化的树脂型号有DA201、NKA9、D101、LD605、AB8、D151、XAD4、XAD7、ADS83、ADS5、HP20[2~7]。其中，D101、HP20、XAD4实为同一种树脂。故本研究将从DA201、NKA9、LD605、AB8、D151、XAD7、ADS3、ADS5、HP209种树脂中筛选一种分离效果较好的型号，现报道如下。　　1仪器与材料　　LC10ATvpplus高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD10Avpplus紫外—可见检测器，紫外—可见分光光度计

4、(ThermoElectroncorporation)，UVmini1240紫外分光光度计。AB8、HP20、LD605、ADS3、ADS5、D151均由天津欧瑞生物科技有限公司提供，DA201、NKA9由沧州宝恩化工有限公司提供，XAD7由美国哈门罗斯公司提供，黄连药材由北京同仁堂(毫州)饮片有限责任公司提供(经广州中医药大学中药鉴定教研室黄海波老师鉴定为毛莨科植物黄连CoptischinensisFranch的干燥根茎)，盐酸小檗碱标准品(批号：110713200609)由中国药品生物制品

5、检定所提供。　　2方法与结果　　21黄连提取液中总生物碱的测定　　211标准曲线的绘制8　　2111检测波长的确定分别吸取盐酸小檗碱标准品溶液和经适当稀释后的黄连提取液，在200～600nm之间进行波长扫描，两者在347nm波长处呈现共有吸收峰，故确定检测波长为347nm。见图1。　　2112标准曲线的绘制精密称取干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品1110mg，置50mL量瓶中，用005mol/LH2SO4溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取盐酸小檗碱对照品溶液02、05、08、10

6、、15、20mL，分别置50mL量瓶中，加005mol/LH2SO4稀释至刻度，摇匀，在347nm波长处测定吸光度。以吸光度X为横坐标，质量浓度Y为纵坐标，进行线性回归。结果表明在000176～1176mg/mL范围内盐酸小檗碱的浓度与吸光度呈良好的线性关系，其回归方程为：Y=00162X-000004，r=09999。　　2010年第27卷广州中医药大学学报212黄连提取液中总生物碱的测定称取黄连药材10g，加8倍量体积分数60%乙醇回流提取3次，每次1h，合并提取液。将提取液移至100

7、0mL的容量瓶中，加体积分数60%乙醇定容至刻度。取1mL样品，置25mL量瓶中，加005mol/LH2SO4定容至刻度。取25mL上述样品，置25mL量瓶中，加005mol/LH2SO4定容至刻度。在347nm处测吸光度为0297。采用此法提取得到的总生物碱为0119g/g药材。8　　22大孔树脂型号的初筛　　221供试品溶液的制备取黄连粉末100g，加8倍量的体积分数60%的乙醇，加热回流提取3次，每次1h，合并3次提取液，过滤。滤液减压真空浓缩至无醇味。将提取液转移至1000mL的容量

8、瓶，加蒸馏水定容至刻度，备用。取1mL上述提取液，置于25mL的容量瓶中，用005mol/L的H2SO4定容至刻度。取上述稀释液25mL，置于25mL的容量瓶中，用005mol/LH2SO4定容至刻度。在347nm波长下测得吸光度为0285。计算得提取液中总生物碱的浓度为1144mg/mL。　　222树脂的预处理根据黄连中生物碱的性质，综合已有的文献报道[2～7]，从众多的树脂型号中选