大孔吸附树脂分离纯化黄连、关黄柏中季铵总碱的工艺研究

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1、大孔吸附树脂分离纯化黄连、关黄柏中季铵总碱的工艺研究【关键词】季铵总碱大孔吸附树脂纯化　　Abstract：ObjectiveTosetupamethodforpurificationoftotalquaternaryammoniumhydroxidefromCoptischinensisFranch.andPhellohendronamurenseRupr.byAB-8macroporousresin.MethodsThetechnicalprocessforpurificationoftotalquaternaryammoniumbasedonAB-8macroporousresinica

2、bsorptionratiothroughorthogonaltests.ResultsTheAB-8macroporousresinoumabsorptionandelutionability.Theoptimumabsorptionconditionspleconcentrationg·ml-1，thePHofsampleacroporousresincanbeusedtopurifytotalquaternaryammoniumhydroxidesuccessfully.Thepurityoftotalquaternaryammoniumhydroxideisabout90%.　　Key

3、moniumhydroxide;Macroporousresin;Purification　　黄连为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch.三角叶黄连CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao.或云连CoptisteetaETTLERAE240分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；紫外可见分光光度计；THZ-C摇床(江苏太仓市华美生化仪器厂)；SartoriusBP2112D型电子天平(德国赛多利斯公司)；BUG25212型超声波清洗机。　　1.2试药　　黄连、关黄柏药材(购自江苏省江扬国药有限公司)；盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所提供)；

4、树脂AB－8，S-8，NKA-9，X-5(南开大学化工厂)；高效液相用甲醇为色谱纯；高纯水；其它试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1含量测定　　2.1.1紫外分光光度法　　精密称取盐酸小檗碱3.6mg，加水定容至50ml。分别精密吸取标准溶液10，5，2.5ml，定容至50ml，为溶液A，B，C。分别精密吸取A溶液10，7.5，5ml,定容至50ml，为溶液D，E，F。精密吸取B液5ml，定容至50ml，为溶液G。精密吸取以上溶液及蒸馏水10.0ml置带塞三角烧瓶中，加pH10缓冲液5.0ml，加水33.0ml，苦味酸钠2.0ml，摇匀，超声波振荡20min，精密加入二氯乙烷10.0ml

5、，振荡3min，置分液漏斗内静置分层，以干燥滤纸滤过，按分光光度法（《中国药典》2005版Ⅰ部附录VA），以10.0ml蒸馏水处理的溶液作为空白，于361nm处测定吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程：Y=0.0829X-0.0306,r=0.9998，线性范围为0.72～14.40μg/ml，样品测定后按此回归方程计算。　　2.1.2高效液相色谱法　　色谱条件：色谱柱为sinochromC18（250mm×4.6mm,5μm)；柱温40.0℃；流速1.0ml/min;流动相为甲醇∶水(31∶69)，每1000ml水溶液含3.3ml三乙胺和140ml36%乙酸;测定波长365nm

6、；理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2500。标准曲线的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品2.0mg,加甲醇定容至10ml,摇匀，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0ml至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20μl，测定峰面积。以峰面积对进样量回归，得回归方程：Y=3541229.41X+29261.55，r=0.9999(n=5)，线性范围为0.0636～1.272μg。样品测定后按此回归方程计算。2.1.3上柱液的制备称取黄连（60g）、关黄柏(60g)粗粉（20目）,加12倍量水回流提取3次,2h/次,提取液滤过,合并,部分浓缩,加等量95%乙

7、醇醇沉，静置过夜，离心20min(5000r/min)，取上清液，浓缩至无醇味，加水,60℃保温30min，离心20min(5000r/min)，加水定容到一定体积(相当于含生药量100mg·ml-1)，即得上柱液。　　2.2大孔吸附树脂选择　　2.2.1大孔吸附树脂的预处理　　100g树脂（干重）加500ml4%氢氧化钠浸泡24h，去离子水洗至pH中性，再加500ml95%乙醇60℃浸泡3h，去