多药耐药基因在癫痫病人外周血表达的临床意义

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1、多药耐药基因在癫痫病人外周血表达的临床意义作者:杨美兰,陈晓燕,张允奇,黄宗清【摘要】目的探索外周血多药耐受(MDR)基因表达与难治性癫痫耐药性的关系。方法用流式细胞仪检测癫痫病人血中P-糖蛋白(Pgp)的表达。结果难治性癫痫组血清Pgp明显高于癫痫治疗有效组和正常对照组。结论Pgp在癫痫耐药的发病机制中起重要作用,其在外周血的高表达可作为癫痫患者耐药的一个客观指标。【关键词】难治性癫痫;P糖蛋白;流式细胞术[Abstract]ObjectiveToexploretherelationshipbetweentheoverexpressionof

2、multidrugresistancegene(MDR)intheperipheralbloodofpatientswithepilepticandthedrugresistanceoftheintractableepilepsy(IE).MethodsTheexpressionofP-glycoprotein(Pgp)intheperipheralbloodofpatientswithIEwasdetectedbyflowcytometer(FCM),andwascomparedwiththoseofhealthysubjectsandepi

3、lepsypatients,whichreactedwelltomedicine.ResultsThelevelofPgpintheserumofIEgroupwassignificantlyhigherthanthoseinepilepsygroupandnormalcontrolgroup.ConclusionThe7overexpressionofPgpmayplayanimportantroleinthedrugresistanceofIE,andcanbeconsideredasanobjectiveindexfordrugresis

4、tanceinpatientswithIE.[Keywords]intractableepilepsy;P-glycoprotein;flowcytometer难治性癫痫(IntractableEpilepsy简称IE)是神经学科研究的热点及难点之一,癫痫耐药是一个由多种因素参与的复杂过程,而癫痫发作呈随机性、多样性,现行的IE诊断[1]需要经过长期的临床实践才能诊断,故极易误诊或漏诊。既往的研究主要从病人手术切除或动物模型的脑组织着手,取材的限制严重影响临床研究的开展及深入。本研究利用半定量的流式细胞仪技术检测癫痫患者外周血中Pgp的表达以探

5、讨MDR在IE中的作用。1对象与方法1.1病例的选择和分组全部病例均来自2004—2008年深圳第四人民医院神经内科就诊的癫痫患者。病例组分为3组,每组均为16例:(1)IE组(A组):男9例,女7例,年龄10~46岁,病史3~9年,均有典型癫痫发作史及脑电图表现,符合IE诊断[1],现联用两种一线AEDs,检测AEDs均在正常范围;(2)药物治疗有效组(B组):7男女各8例,年龄12~49岁,病史2~6年,均有典型癫痫发作史及脑电图表现,经一线AEDs正规治疗2年未发作,至少半年未发作,排除其他中枢神经系统疾病或占位病变;(3)健康对照组(C

6、组):16名,为本院无癫痫及其他重大疾病的健康体检者,均无癫痫发作史,男女各8例,年龄14~52岁。1.2主要实验试剂及设备购自BeckmanCoulter公司的Pgp单克隆抗体CD243-PE、IgG2a-PE、溶血素(Lysingsolution)及库尔特EpicsXL型流式细胞仪。1.3实验方法全部标本用流式细胞仪按下列方法[2]检测Pgp的表达相对量:(1)在检测管和同型对照管中加入肝素抗凝血100μl后,检测管中加入CD243-PE20μl,对照管中加入IgG2a-PE20μl,混匀后室温下避光孵育30min;(2)加入溶血素溶血10

7、min;(3)PBS洗涤2次;(4)用流式细胞仪以淋巴细胞设门,收集1万个白细胞,用CELLQUEST统计软件计算Pgp表达阳性的细胞百分数。1.4统计学处理采用SPSS11.5软件进行统计处理,数据用(x±s)表示,行ANOVA分析法中的LSD法进行检验分析,P<0.05为差异有显著性。2结果7见表1。表1三组P-糖蛋白表达的相对量注:CBZ:卡马西平;VPA:丙戊酸钠;PHT:苯妥英钠。年龄、性别、病程均无统计学差异,A组与B组的AEDs无统计学差异。*表示Pgp表达量B、C组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),▲表示B、

8、C组比较差异无显著性(P>0.05)。3讨论癫痫的耐药机制形成复杂,至今尚未完全阐明。在临床实践中人们发现如果患者对某种AEDs耐受,往往对其他

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