emb基因密码子分子dna探针设计及荧光检测

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1、EMB基因330密码子分子DNA探针设计及荧光检测>emb基因330密码子分子dna探针设计及荧光检测【关键词】耐乙胺丁醇embb基因；330密码子点突变；分子dna探针；荧光分光光度计【摘要】目的针对结核杆菌耐乙胺丁醇embb330密码子位点设计分子dna探针，尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中分子dna探针与embb330密码子扩增产物杂交后的荧光信号，从而检出该位点突变。方法运用软件beacondesigner设计embb基因包含330密码子的分子dna探针，应用荧光分光光度计检测embb306密码子

2、扩增片段与探针杂交后荧光信号，比较扩增产物测序结果。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及embb330密码子突变株pcr产物与探针杂交后荧光信号存在显著差异；33株耐乙胺丁醇组与10株h37rv标准株对照组荧光信号强度比较，耐乙胺丁醇组embb330密码子突变检出率为3%，测序法突变检出率为3%。结论分子dna探针技术可以有效检测embb330密码子单碱基靶点突变；应用荧光分光光度计直接观测液相荧光杂交信号简单、灵敏。【关键词】耐乙胺丁醇embb基因；330密码子点突变；分子dna探针；荧光分光光度计fl

3、uorescencedetectionandmoleculardnaprobedesignof330codoninembbgenechenqinghai,fuweiling,liuchunjiang,wuwei,kuanghong(southwesthospital,thirdmilitarymedicaluniversity,chongqing400038，china)abstract:objectivetodesignmoleculardnaprobedetectingembb330codonofe

4、thambutolresistantmycobacteriumtuberculosis(mtb)，andtodetectfluorescenceofmutationsiteofembb330codoninliquidbyfluorescencespectrophotometer.methodsthesoftware，beacondesigner，wasusedtodesignmoleculardnaprobedetectingembb306codonanddetectingfluorescencesignal

5、fromhybridizationbetweentheamplifiedproductandprobebyfluorescencespectrophotometer，andconfertothesequencingresults.resultsthedifferencebetweenpcrproductsfromstandardstrainandethambutolresistantoneisobviousindetectingthefluorescentlightbyuseoffluorescencemic

6、roscope.wedetectedfluorescentlightsignalbetweenthe33ethambutolresistantstrainsand10h37rvstandardstrains.therateofresistantethambutoldetectedisabout3%，andtherateofsequencingisabout3%.conclusionthetechnologyofmoleculardnaprobecaneffectuallydetectamutationsing

7、lebasylsiteofembb330codon.fluorescencespectrophotometerhavecharacteristicssuchashighsensitiveness，simpletodirectlydetectthefluorescentlightinliquid.keywords:ethambutolresistantembbgene;330codonofmutationsite;moleculardnaprobe;fluorescencespectrophotometer近年

8、来，国内外学者在分子水平上对引起结核乙胺丁醇(ethambutol，emb)耐药的突变基因作了详尽的研究。www.133229.cOM研究结果表明结核杆菌embb基因306位密码子突变是耐emb产生的主要原因，其他285、303、330密码子等突变也是引起该类耐药的重要原因［1］。针对广泛存在的单碱基突变位点不易检测，应用分子探针高灵敏直接检测单碱基突变是近年来一个重要技术发展。其中具有茎环结构分子