emb基因330密码子分子dna探针设计及荧光检测的论文

《emb基因330密码子分子dna探针设计及荧光检测的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、EMB基因330密码子分子DNA探针设计及荧光检测的论文emb基因330密码子分子dna探针设计及荧光检测【关键词】耐乙胺丁醇embb基因；330密码子点突变；分子dna探针；荧光分光光度计【摘要】目的针对结核杆菌耐乙胺丁醇embb330密码子位点设计分子dna探针，尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中分子dna探针与embb330密码子扩增产物杂交后的荧光信号，从而检出该位点突变。方法运用软件beacondesigner设计embb基因包含330密码子的分子dna探针，应用荧光分光光度计检测embb30

2、6密码子扩增片段与探针杂交后荧光信号，比较扩增产物测序结果。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及embb330密码子突变株pcr产物与探针杂交后荧光信号存在显著差异；33株耐乙胺丁醇组与10株h37rv标准株对照组荧光信号强度比较，耐乙胺丁醇组embb330密码子突变检出率为3%，测序法突变检出率为3%。结论分子dna探针技术可以有效检测embb330密码子单碱基靶点突变；应用荧光分光光度计直接观测液相荧光杂交信号简单、灵敏。【关键词】耐乙胺丁醇embb基因；330密码子点突变；分子dna探针；荧光分

3、光光度计fluorescencedetectionandmoleculardnaprobedesignof330codoninembbgenechenqinghai,fuilitarymedicaluniversity,chongqing400038，china)abstract:objectivetodesignmoleculardnaprobedetectingembb330codonofethambutolresistantmycobacteriumtuberculosis(mtb)，andtod

4、etectfluorescenceofmutationsiteofembb330codoninliquidbyfluorescencespectrophotometer.methodsthesoftoleculardnaprobedetectingembb306codonanddetectingfluorescencesignalfromhybridizationbetplifiedproductandprobebyfluorescencespectrophotometer，andconfertothes

5、equencingresults.resultsthedifferencebetstandardstrainandethambutolresistantoneisobviousindetectingthefluorescentlightbyuseoffluorescencemicroscope.butolresistantstrainsand10h37rvstandardstrains.therateofresistantethambutoldetectedisabout3%，andtherateofse

6、quencingisabout3%.conclusionthetechnologyofmoleculardnaprobecaneffectuallydetectamutationsinglebasylsiteofembb330codon.fluorescencespectrophotometerhavecharacteristicssuchashighsensitiveness，simpletodirectlydetectthefluorescentlightinliquid.keybutolresist

7、antembbgene;330codonofmutationsite;moleculardnaprobe;fluorescencespectrophotometer近年来，国内外学者在分子水平上对引起结核乙胺丁醇(ethambutol，emb)耐药的突变基因作了详尽的研究。.研究结果表明结核杆菌embb基因306位密码子突变是耐emb产生的主要原因，其他285、303、330密码子等突变也是引起该类耐药的重要原因［1］。针对广泛存在的单碱基突变位点不易检测，应用分子探针高灵敏直接检测单碱基突变是近年来一个

8、重要技术发展。其中具有茎环结构分子dna探针就是一类根据核酸碱基配对原则和荧光共振能量转移(fret)现象而设计的dna探针，对单碱基检测具有很高的灵敏性和特异性［2］。本研究选择结核杆菌耐乙胺丁醇一个重要突变位点embb330密码子，设计相应的分子dna探针，通过扩增及杂交、采用荧光分光光度计观测液相杂交荧光信号，并比较测序结果，为结核杆菌耐药位点准确测定提供一种新手段。1材料与方法1.1乙胺丁醇耐药菌株、标准株来源及其基因