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《人参皂苷rg1、rb1对淀粉样前体蛋白分泌酶代谢途径的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、人参皂苷Rg1、Rb1对淀粉样前体蛋白分泌酶代谢途径的影响作者：魏翠柏,贾建平,王芬,贾龙飞【摘要】目的观察人参皂苷Rg1、Rb1对淀粉样前体蛋白代谢途径中α分泌酶活性和基因表达的影响。方法用转染突变型PS1(ML46L)和野生型PS1的CHO细胞,通过荧光酶标技术检测α分泌酶活性,Westernblot免疫印迹、RT-PCR技术检测α分泌酶基因ADAM9、ADAM10的蛋白和RNA表达。结果转染突变型PS1ML46L组α分泌酶活性较转染野生型PS1(WT组)低(P<0.05),加用人参皂苷Rg1、Rb1后转染突
2、变型PS1ML46L组α分泌酶活性较未加用组不同程度增高(P<0.05),同时ADAM9、ADAM10的蛋白及RNA表达较未加用组有不同程度增多(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1、Rb1均可不同程度增加α分泌酶中ADAM9、ADAM10基因表达,提高α分泌酶活性,且人参皂苷Rg1调节作用优于人参皂苷Rb1。【关键词】人参皂苷Rg1；人参皂苷Rb1；淀粉样前体蛋白分泌酶；阿尔茨海默病 Keywords：GinsenosideRg1；GinsenosideRb1；secretaseofamyloidprec
3、ursorprotein；Alzheimer’sDisease11β-淀粉样蛋白(beta-amyloidprotein,Aβ)在细胞外沉积构成的老年斑是阿尔茨海默病(Alzheimer’sDisease,AD)主要病理学特征之一。Aβ由淀粉样前体蛋白(amyloidprecursorprotein,APP)经α和β两种分泌酶裂解产生。有效地调整分泌酶活性和功能是防治AD的重要途径。人参皂苷Rg1、Rb1是人参的主要有效成分。有报道,人参皂苷Rg1、Rb1具有抗氧化、抑制凋亡、抗兴奋性氨基酸毒性及有效抑制细胞外APP增
4、多诱导的细胞凋亡等多种保护作用[1-2]。本研究拟研究人参皂苷Rg1、Rb1对APP代谢中分泌酶的影响,进一步探讨人参皂苷Rg1、Rb1对AD可能的防治作用。 1实验材料 1.1细胞来源及培养突变型PS1ML46L和野生型APP751双转染细胞系(PS1ML46L/APP751)、野生型PS1和野生型APP751双转染中国仓鼠卵巢瘤细胞系(TW组)、中国仓鼠卵巢瘤细胞系(CHO)由美国哈佛大学医学院神经疾病研究中心构建,经中国医学科学院基础研究所梁平教授转赠。细胞均在37℃含有5%CO2的饱和湿度下培养,CHO细胞
5、系培养用高糖DMEM,加入20%FBS,其中PS1ML46L/APP细胞培养基外加250μ11g/mLG418、2.5μg/mLPuromycin。 1.2试剂及药物天然药物单体标准品人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1均购自中国药品生物制品检定所。ADAM9小鼠抗人单克隆抗体(批号ENM0139091)、ADAM10小鼠抗人单克隆抗体(批号FAL02)均购于美国RD公司。辣根过氧化物酶(HRP)耦联羊抗小鼠二抗和羊抗兔二抗(批号73452)。RT-PCR试剂盒(批号18080-051)购于美国Invitrogen公司。总
6、RNA提取试剂盒(批号18341)购于美国Promega公司。α分泌酶活性检测试剂盒(批号FP001)为美国R&D生物公司出品。 2实验方法 2.1总RNA提取按照RNAgentsTotalRNAIsolationSystem(Promega)试剂盒和superscriptTIMⅢFirst-StrandSynthesisforRT-PCR试剂盒操作,提取总RNA并完成RT-PCR。Beta-actin扩增产物作为内参,所用引物由上海Sangon生物工程服务有限公司合成。引物的碱基序列及扩增的目的基因片段长
7、度如下：①BACE1(上游：5’-AAGATGTTCGGAATGTGGGT-3’；下游：5’-CAGGGCTACTATGTGGAGATGA-3’)。②11ADAM9(上游：5’-AGTTCCTGGACCCTGATGC-3’；下游：5’-TTCTCCCGCAGACCCGCTAC-3’)。③ADAM10(上游：5’-CACTTGGCTTATGTTCCTA-3’；下游：5’-CTGCTTGGCCTATGTCTTC-3’)。用Fluochemy5500凝胶图像分析仪采集图像,经ImageMasterTMTotalLabSoft
8、ware图像分析软件计算条带光密度值。 2.2α分泌酶活性荧光酶标测试按照α分泌酶活性荧光酶标检测试剂盒中的操作说明。培养细胞经胰蛋白酶消化,以1000g离心10min,弃上清。以50×106cells/mL比例加入冷1×CellExtractionBuffer裂解细胞。冰浴20min后,10000g离心1min,取上清液,放置
