尿香草扁桃酸(vma)测定

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1、尿香草扁桃酸（VMA）测定操作规程分析化学室尿香草扁桃酸（VMA）测定分光光度法参考值：　　　　　　　　　　　　　　　　年龄mg／24hμmol／24h0～10天＜0．1＜0．510天～24个月＜2．0＜1024个月～18岁＜5．0＜25成人2～710～35（一）原理用乙酸乙酯从酸化尿液中提取VMA和其他酚酸，然后反提取到碳酸钾水层。加入高碘酸钠（NaIO4），使VMA氧化成香草醛（vanillin）。用甲苯从含有酚酸杂质的溶液中选择性提取香草醛，再用碳酸盐溶液反抽提到水层，用分光光度计于波长360nm测定水层中香草醛的浓度。（二）病人准备与标本处理1．收集标本前1周限

2、制病人食用含有香草醛类的食物，如巧克力、咖啡、柠檬、香蕉以及阿司匹林和一些降压药物，这些药物中含有酚酸对该法有阳性干扰，可使结果假性升高。2．尿量应通过饮水调控在1000～3000ml／24h之间。3．收集24小时尿液加浓盐酸约10ml或甲苯5ml防腐。若尿液不能及时进行测定，应置冰箱2～8℃保存，以免VMA被破坏而使测定数值减低。（三）试剂1．6mol／LHCl。2．NaCl（固体）。3．乙酸乙酯。4．1mol／L碳酸钾：称取138g无水碳酸钾溶于蒸馏水中并补足至1L。室温保存，超过一个月须重配。5．20g／L偏高碘酸钠：称取2g偏高碘酸钠（NaIO4MW213.89

3、），溶于蒸馏水中并补足至100ml。须当天新配。6．100g／L偏重亚硫酸钠：称取10g偏重亚硫酸钠（MW190.10）溶于蒸馏水中并补足至100ml，须当天新配。7．5mol／L乙酸：取286ml冰乙酸加蒸馏水至1L。8．1mol／L磷酸盐缓冲液，PH7.5A液：取286g磷酸二氢钠（Na2HPO4·7H2O），加蒸馏水至1L，置冰箱保存。B液：取27.22g磷酸二氢钾（KH2PO4），加蒸馏水至200ml，置冰箱保存。取A液168.2ml与B第3页，共3页尿香草扁桃酸（VMA）测定操作规程分析化学室液31.8ml混合，用酸度计核对或调节至pH7.5，置冰箱保存。9．

4、0.01mol／LHCl。10．标准液（1）VMA标准贮存液（1mg／ml，5.05mmol／L）：精确称取100mgVMA（MW198.17）置于100ml容量瓶中，加0.01mol／LHCl至刻度，混匀。置冰箱保存，约可稳定3个月。（2）VMA（10μg／ml，50.5μmol／L）：取10ml标准贮存液，加0.01mol／LHCl至100ml，用前新鲜配制。（四）操作1．取3支具塞50ml试管，标记“测定管”、“内标准管”和“未氧化空白管”，分别加入1份尿液（相当于24小时尿总量的0.2％体积）。2．向“内标准管”中加入VMA标准应用液1.0ml。3．用蒸馏水将各

5、管体积补足至5.5ml再加入6mol／LHCl0.5ml，使尿液进一步酸化。4．向各管加入固体氯化钠（约3g），充分混匀使过饱和，再加入乙酸乙酯30ml，用力振摇30min，离心(?1500rpm)5min，提取VMA。5．取第二批具塞试管3支，同样标记“测定管”、“内标准管”和“未氧化空白管”，各加1mol／L碳酸钾溶液1.5ml。然后，分别依次加入相应的乙酸乙酯提取液（上层）25ml，用力振摇3min，离心(?1500rpm)5min，吸弃上层乙酸乙酯层。6．取第三批具塞大试管3支，同样标记“测定管”、“内标准管”和“未氧化空白管”，分别依次加入相应的碳酸钾提取液（

6、下层）1.0ml。7．向“测定管”、“内标准管”加入20g／L高碘酸钠0.1ml，混匀，“未氧化空白管”不加高碘酸钠。所有试管均置50℃水浴30min。然后，取出各管冷却至室温。向“未氧化空白管”补加20g／L高碘酸钠0.1ml，混匀。8．立即向各管加入100g／L偏重亚硫酸钠0.1ml，还原反应液中残留的高碘酸钠。9．向各管加入5mol／L乙酸0.3ml，以中和反应液，混匀后放置10min。10．向各管加1mol／L磷酸盐缓冲液（pH7.5）0.6ml（可加入0.4g／L甲酚红1滴检查pH。此时，溶液必须呈黄色，表示pH＜8.8）。11．向各管加入甲苯20ml，用力振

7、摇3min，离心(?1500rpm)5min，提取VMA的氧化产物香草醛。12．取第四批具塞大试管3支，标记“测定管”、“内标准管”和“未氧化空白管”，各加1mol／L碳酸钾4ml，然后分别依次加入相应的甲苯提取液（上层？下层？）15ml，用力振摇3min，离心(?1500rpm)5min。13．分别将下层碳酸钾提取液（含香草醛）吸到比色杯中，于波长360nm第3页，共3页尿香草扁桃酸（VMA）测定操作规程分析化学室处用蒸馏水调零，读取各管吸光度（A测定、A内标和A空白）。（五）计算尿液VMA（μmol／d）＝尿液VMA（mg／d）×5.