实验四尿肌酐定量测定（碱性苦味酸法）.ppt

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1、实验四尿肌酐的定量测定(碱性苦味酸法)复习和巩固尿肌酐的生成机理及其生化评定的意义学习尿肌酐测定方法掌握尿肌酐系数指标的计算及其在运动实践中的应用。一、实验目的无蛋白尿液中的肌酐与碱性苦味酸盐反应，经“Jaffe”氏反应生成红色的苦味酸肌酐，其生成量与肌酐含量成正比，用比色法即可求出尿中肌酐含量。二、实验原理肌酐+碱性苦味酸Jaffe氏反应苦味酸肌酐（红色复合物）（520nm处有一吸收峰）三、试剂饱和苦味酸溶液：称取苦味酸15g置于大烧杯中，加蒸馏水至1000ml，加热助溶，冷却至室温，瓶底若有结晶析出，表示已饱和，取上层清夜备用，储存在棕色瓶中。10%氢氧化钠溶液碱性苦味

2、酸试剂：将饱和苦味酸和10%氢氧化钠溶液按5:1体积比混合，临用时配制。肌酐标准贮存液（1ml=1mg）：称取纯肌酐0.1g置于100ml容量瓶中，加10%盐酸溶解稀释至刻度。此溶液在4℃冰箱内可以长期保存。肌酐标准应用液（1ml=0.1mg）：准确量取贮存液10ml于100ml的容量瓶中，加入10%盐酸10ml，再加蒸馏水至刻度。此溶液可以在4℃冰箱内保存1周。收集受试者24h尿液，混匀后取0.1ml置大试管中，加9.9ml蒸馏水，摇匀。四、实验操作1、制备稀释尿液（1:100）2、尿肌酐浓度的测定取3只大试管，编号，按表1操作：空白管标准管测定管肌酐标准应用液（ml）—

3、0.5———50.20.20.25.04.5—111充分混匀后，放置10min，以空白管调零，520nm波长比色表1尿肌酐的测定计算公式：OD测尿肌酐（mg%）==-------------------×200OD标（0.12）24小时尿肌酐量（mg）尿肌酐系数==----------------------------------------体重（Kg）五、实验结果显色反应10-15分钟内比色，如果时间过长，尿液中其它物质能与碱性苦味酸起非特异性反应而影响结果。如测定管显色过深，应再将稀释尿液后测定，其结果乘以稀释倍数。六、注意事项七、指标应用正常人尿肌酐日排出量：男子1

4、.0~1.8g，女子0.7~1.0g。24h每千克体重排出的尿肌酐毫克数称尿肌酐系数。正常人尿肌酐系数为：男子18~32mg/kg体重，女子10~25mg/kg体重尿肌酐日排出量与肌肉中磷酸肌酸和肌酸的含量有关，运动员尿肌酐系数高于常人，一般为25~40mg/kg体重。不同项目的运动员其系数也不同，力量、速度项目运动员尿肌酐系数可高达36~42mg/kg体重，且尿肌酐的日排出量与运动成绩高度相关。在运动员机能评定中，尿肌酐系数可作为力量素质与速度素质的评定、选材、训练效果的检测指标，尿肌酐系数高是肌肉机能好的反映，反之，可能是肌肉机能下降的表现。