pparγ在肝外胆管癌中的表达及其意义

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1、PPARγ在肝外胆管癌中的表达及其意义作者：刘兵王文斌王安峰吕海涛刘明【摘要】目的观察PPARγmRNA和蛋白在肝外胆管癌组织中的表达，并探讨其与肝外胆管癌临床病理特征之间的关系。方法采用RTPCR和Western印迹检测PPARγmRNA和蛋白在30例肝外胆管癌组织中的表达情况。结果RTPCR法检测结果显示肝外胆管癌组织中，淋巴结转移组和无淋巴结转移组PPARγmRNA表达分别为0.47±0.06和0.24±0.07，差异有统计学意义(P<0.01);低分化组和高中分化组PPARγmRNA表达分别为0.3±0.19和0.17±0.01，差异无统计学意义

2、(P>0.05);Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期肝外胆管癌组织PPARγmRNA表达分别为0.63±0.35和0.63±0.28，差异无统计学意义(P>0.05)。Western印迹结果显示肝外胆管癌组织中，淋巴结转移组和无淋巴结转移组PPARγ蛋白表达水平分别为2.0±0.44和0.93±0.21，差异有统计学意义(P<0.01);低分化组和高中分化组中，PPARγ蛋白表达分别为0.87±0.23和0.96±0.15，差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期，PPARγ蛋白表达分别为2.45±0.54和1.95±0.24，两组差异无统计学意义(P

3、>0.05)。结论PPARγ可能对肝外胆管癌的发生和发展起促进作用。8【关键词】PPARγ;肝外胆管癌;逆转录聚合酶链式反应;免疫印迹过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是一类由配体激活的核转录因子，参与调节脂质代谢与糖代谢、脂肪细胞分化和能量平衡、炎症反应、动脉粥样硬化及肿瘤细胞的分化与凋亡等生理和病理过程，其中PPARγ与肿瘤的关系已日益引起人们关注。研究发现，PPARγ位于机体多种信号传导的交叉点，相关文献已经证明PPARγ配体(pioglitazone，PGZ)对肝门胆管癌细胞系QBC939细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用，从而成为新的肿瘤治疗

4、靶点〔1〕。然而，PPARγ在胆管癌组织中的表达尚无报道。本文利用RTPCR及Western印迹技术检测PPARγmRNA和蛋白在肝外胆管癌中的表达情况，并探讨其表达与肝外胆管癌临床病理特征的关系。　　1材料与方法　　1.1材料手术切除并经病理证实的肝外胆管癌组织30例(腺癌26例，其中高中分化15例，低分化11例;黏液腺癌4例)，男18例，女12例，年龄37～74(平均57.2)岁。术前均未作放疗、化疗、免疫治疗等抗肿瘤治疗。Ⅰ期11例，Ⅱ、Ⅲ期19例。淋巴结转移7例，无淋巴结转移23例。所有患者均取新鲜癌组织标本，取材后迅速投入液氮中冷冻保存。引物由上海生物

5、工程有限公司合成。8　　1.2RTPCR检测PPARγmRNA表达采用异硫氰酸胍一步法提取肝外胆管癌总RNA，反转录合成cDNA。PCR反应：PPARγ引物序列为正义：5′GCAGTGGGGATGTCTCATAATGC3′，反义:5′CAGGGGGGTGATGTGTTTGAAC3′，产物长度为328bp。GAPDH引物序列为：正义：5′GGAAGGTGAAGGTCGGAGT3′，反义：5′CCTGGAAGATGGTGATGGG3′，产物长度为231bp。反应条件：94℃变性5min，94℃50s，54℃30s，72℃30s，35次循环后72℃延伸

6、10min。PCR产物于1.5%琼脂糖凝胶中电泳，90V，40min，紫外分析仪中观察并照相，凝胶分析软件定量。采用凝胶分析软件(BIO1D)分析各条带平均灰度值，以PPARγ与内参照基因GAPDH的灰度比值表示PPARγmRNA相对表达量。　　1.3Western印迹检测PPARγ蛋白的表达冰PBS洗涤后的组织加入蛋白裂解液，匀浆收集上清。蛋白定量后，经10%SDSPAGE后转移至PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭4h，加入1∶400一抗〔小鼠抗人PPARγ(E8)单克隆抗体，SantaCruz公司〕4℃过夜，二抗室温孵育1h后，ECL发光。以PPARγ与βa

7、ctin条带的比值表示PPARγ蛋白的表达量。　　1.4统计学方法采用SPSS11.5统计软件进行分析;采用单因素方差分析(ANOVA)，数据采用x±s表示。8　　2结果　　2.1PPARγmRNA表达与肝外胆管癌临床病理特征的关系RTPCR检测结果显示：肝外胆管癌组织中，淋巴结转移组和无转移组PPARγmRNA表达水平分别为0.47±0.06和0.24±0.07，差异有统计学意义(P<0.01)(图1)。低分化组和高中分化组中PPARγmRNA表达分别为0.3±0.19和0.17±0.01，差异无统计学意义(P>0.05)(图2)。Ⅱ、Ⅲ期和Ⅰ期癌

8、组织PPA