peg5000修饰后假丝酵母尿酸酶的基本特性

《peg5000修饰后假丝酵母尿酸酶的基本特性》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、PEG5000修饰后假丝酵母尿酸酶的基本特性作者：孙晓军金磊甘志勇刘冬【摘要】　　目的研究天然尿酸酶与PEG化尿酸酶的基本特性，为治疗高尿酸血症相关疾病药物做基础研究。方法用相对分子量5kD,活化基团为羟基琥珀亚氨的PEG作为专一性修饰剂对尿酸酶进行修饰，采用常规酶学分析方法，分别研究天然尿酸酶与PEG化尿酸酶的动力学参数，并比较修饰前后对抑制剂黄嘌呤的敏感性、最适温度、最适pH值、37℃时的稳定性以及在体半衰期等方面的差异。结果经PEG修饰后尿酸酶最适温度由30℃升为35℃，最适pH无改变仍为pH8.7；在37℃水浴下,24h后活性保留由40%增至70%，酶稳定性提高，体内半衰

2、期由45min延长至11h；测定尿酸酶和PEG化尿酸酶的Km分别为32.40、36.34μmol/L，黄嘌呤对尿酸酶与PEG化尿酸酶抑制常数分别为4.72、11.30μmol/L。结论假丝酵母尿酸酶经PEG5kD修饰后有药用潜力。【关键词】高尿酸血症；尿酸酶；PEG修饰；稳定性　　【Abstract】ObjectiveToresearchthebasiccharacteristicsofnaturaluricaseandPEGuricase,preparePEGuricase,modifytheCandidauricasewithPEG5000to12improvethest

3、abilityoftheCandidauricaseandextendthehalflifeofuricaseinvivo.MethodsPEG(relativemolecularweight5kD,activationgroupfortheNHSAsianammonia)wasusedasapecialmodifiertomodifyuricase.Withtheconventionalenzymaticanalysis,somekineticparametersofnaturaluricaseandPEGuricasewerestudied,andcomparedthedi

4、fferencesofthesensitivityoftheinhibitorofxanth,optimumtemperature,optimumpH,thestabilityat37℃andthehalflifeinvivobeforeandaftermodification.ResultsItwasdemonstratedthatafterPEGmodificationtheoptimaltemperatureoftheuricasewasupgradedfrom30℃to35℃,theoptimumpHwasstill8.7withnochanging.37℃waterba

5、th,24hpostactiveretentionincreasedfrom40%to70%,theenzymestabilitywasimproved,thehalftimeinvivoextendedfrom45minto90min.TheKmofuricaseandPEGuricasewere32.40and36.34μmol/L,theinhibitionconstantsofxanthineonuricaseandPEGuricasewere4.72,11.30μmol/L.ConclusionsPEGmodifieduricasefromtheCandidau

6、tilisispromisingtobeabiodrugfortreatinghyperuricemia.　　【Keywords】12Hyperuricemia；Uricase；Pegylation；Stability　　尿酸为嘌呤分解终产物并主要通过肾脏排泄，血清尿酸水平是肾脏功能监测的有效指标。尿酸酶（uricase,EC1.7.3.3)专一催化氧化尿酸生成尿囊素、二氧化碳和过氧化氢，广泛用于临床检验领域测定血清尿酸。人体内缺乏尿酸酶时血清尿酸过高，易造成高尿酸血症，是心血管疾病、痛风等的主要诱因〔1，2〕。细菌、假丝酵母菌等微生物〔3～6〕及多数植物和低等动物都有活性尿酸酶

7、。多数尿酸酶最适pH在8.5以上，但人体血浆pH接近7.4，在血浆中有较高比活性的尿酸酶才是理想的药用尿酸酶〔7〕。真菌尿酸酶在人体血浆中能保留较高的比活性，是理想的药用尿酸酶来源〔8〕，很早就有人尝试用假丝酵母尿酸酶治疗高尿酸血症，但至今没有成功开发出治疗高尿酸血症的药物蛋白。本文用相对分子量为5kD、活化基团为羟基琥珀亚氨的PEG作为专一性修饰剂，对产朊假丝酵母菌所产的尿酸酶进行修饰，以提高产朊假丝酵母尿酸酶的稳定性，延长在体半衰期，为药用尿酸酶奠定基础。　　1资