产朊假丝酵母尿酸酶的纯化、特性的研究与其基因扩增

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称BSACHCACM．cellulosebovineserumalbumin0L·-Cyano-4·-hydroxycinnamicacidcarboxymethylcelluloseDEAE—cellulosediethylaminoethylcellulose中文全称牛血清白蛋白a．氰基．4．羟基肉桂酸羧甲基纤维素二乙氨基乙基纤维素DETAPAdiethylenetriaminepentaaceticacid二乙基三氢基五乙酸DMSOdimethyls

2、ulfoxide二甲基亚砜DTTdithiothreitol二硫苏糖醇EDTAethylenediaminetetra—aceticacid乙二胺四乙酸‰Michaelisconstant米氏常数Ktinhibitionconstant抑制常数MALDI．TOF-MSmatrix-assistedlaserdesorption基质辅助激光解析电离ionizationtime—of-flightmass飞行时间质谱minPAGEPCRPEG，印mSDSSDS．PAGESP“sspectrumminute分钟polyac

3、rylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳polymerasechainreaction聚合酶链反应polyethyleneglycol聚乙二醇correlationcoefficient相关系数roundsperminute每分钟转速sodiumdodecylbenzenesulfonate十二烷基硫酸钠polyacrylamidegelelectrophoresisSDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳Sulfopropyl磺基丙基Tri(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲

4、基氨基甲烷1重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所量交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特裂加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其健人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位戏证书两使用过的楗辩，与我圈工作的臻志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：邀堡国日期：zoo,8二芦．：蔓学位论文版权使用授权书本入完全了解重庆医科大学有关保护知识产权

5、的规定，印：研究生在攻读学位期闻论文工作的知识产权单位属燕庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阕和借阕。学校可以公布学位论文昀全部或部分内容《保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其能手段保存论文．论文作者签名：达叁!三璺指导教l师签名：∑彖暨2薹日期：兰!签：!：兰重庆医科大学硕‘l：研究生学位论文产朊假丝酵母尿酸酶的纯化、特性研究及其基因扩增摘要尿酸是人体嘌呤碱基分解代谢终产物，经肾脏排泄。体内尿酸

6、生成超过肾脏排泄时血清尿酸会显著升高，造成高尿酸血症。高尿酸血症与痛风、心血管疾病、肿瘤裂解综合征及肾脏疾病的引发或加剧密切相关。因此，需要开发有效的药物来治疗高尿酸血症。当前，尿酸酶被认为是治疗高尿酸血症相关疾病的理想药物。本项目对产朊假丝酵母菌(C．GM．C．C．2．1008)及其尿酸酶进行了如下研究：1．产朊假丝酵母菌的培养及其尿酸酶的制备、纯化产朊假丝酵母菌(C．GM．C．C．2．1008)经一定浓度尿酸诱导培养后，离心收集菌体，超声粉碎，离心，取上清即粗酶液，经硫酸铵分级沉淀后，尿酸酶比活性>O．32U／m

7、g蛋白。在DEAE-cellulose52柱上，pH8．0时此尿酸酶不被吸附，两次层析后所得比活性达7．1U／mg蛋白。2．尿酸酶的特性研究SephadexG．200凝胶过滤层析推测此尿酸酶的分子量为134．0kD。SDS—PAGE分析DEAE—cellulose52纤维素柱层析两次所得最高比活性尿酸酶带1][fflJ(>7．0U／mg蛋白)，发现此酶只含一种约33．0kD的多肽，MALDI．TOF．MS分析最高比活性样品没有检测到单一肽链，而丰度最高成分为67．7kD，次高成分为131．4kD。25+0．5℃时，此

8、尿酸酶最适pH接近8．8，在pH7．4时可保留50％以上活性，37℃时4h内稳定，米氏常数为(32．84-3．1)gmol／L(n--10)。抑制剂谱测定发现：9重庆医科大学硕士研究生学位论文除腺苷、鸟苷和肌苷对该尿酸酶无抑制作用外，氧嗪酸钾的抑制常数为(1．1+0．1)umol／L∽=3)，黄嘌呤的抑制常数为(4．8+0．2)肛mol／L(疗