eb1基因表达与胚胎染色体数目异常的关系

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1、EB1基因表达与胚胎染色体数目异常的关系作者：刘青松，翁亚光，杨戎，施琼，蔡燕，刘子杰，徐远久，蒋宏彦【摘要】目的研究EB1基因在胚胎绒毛细胞中的表达，并分析其对染色体分离的影响。方法采用荧光定量PCR技术检测EB1基因在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞和自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中的表达差异；免疫组织化学方法检测EB1蛋白在两者中的表达情况，并用Westernblot加以验证。结果EB1基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞中为0.01004±0.008223，在自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中为0.1509±0

2、.0633。Westernblot和免疫组织化学结果表明其在自然流产绒毛核型分析异常胚胎细胞中的表达也高于其在人工流产绒毛核型分析正常胚胎细胞中的表达。经统计分析，EB1基因mRNA水平和蛋白水平在上述两组细胞中的表达均有显著差异。结论EB1基因在自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中的表达明显高于其在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞中的表达，其高表达可能导致染色体分离异常。【关键词】EB1基因；染色体；胚胎　　TherelationshipofEB1geneexpression13with　chromosomenumberabnormityembryo　　ABSTRACT:Ob

3、jectiveToinvestigateEB1expressioninembryoniccellsandanalyzetheeffectofEB1onchromosomesegregation.MethodsEndogenousEB1mRNAandproteinlevelsinembryoniccellsoftrophonemafromartificialabortionandspontaneousabortionwerecompared,usingfluorescencequantitativePCR,immunohistochemistryandwesternblot,res

4、pectively.ResultsMeanratiosofEB1mRNA/GAPDHmRNAwere0.0100±0.0082and0.1509±0.0633,respectively.TheproteinlevelofEB1washigherintheformerthanthelatter.ConclusionTheexpressionofEB1issignificantlyhigherinembryoniccellsoftrophonemafromspontaneousabortionthanfromartificialabortion,andtheincreasedexpr

5、essionofEB1mayleadtoabnormalityofchromosomesegregation.　　KEYWORDS:EB1gene;chromosome;embryo13　　染色体是细胞内维持遗传物质稳定和保证其完整、准确传递的基本结构。在细胞分裂过程中，染色体的正常分离受到多种基因的严密监控，以保证细胞分裂的正常进行。纺锤体微管与染色体的连接是保证染色体正常分离的前提，同时，只有在细胞分裂的中期所有染色体与纺锤体微管连接并排列在细胞赤道面时，细胞中的染色体才能正常地向细胞的两极移动并进入两个子细胞。有研究表明微管末端结合蛋白在微管生长、稳定及与细胞器的连接方面起

6、到重要的作用。EB1是一种微管末端结合蛋白，位于生长中的微管正端，与结肠腺瘤病(adenomatouspolyposiscoli,APC)蛋白相互作用起到连接微管与细胞皮层及染色体的作用[1]。EB1的这些功能对于中心体的定位和染色体分离具有潜在的作用。基于此点，本研究比较分析EB1在人工流产绒毛核型分析正常的胚胎细胞和自然流产绒毛核型分析异常的胚胎细胞中mRNA和蛋白的表达情况，并初步探讨EB1基因表达与胚胎染色体数目异常的关系。　　1材料与方法　　1.1菌种菌种为JM109，来自重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室。　　1.2主要试剂和仪器DMEM和RPMI1640培养

7、基由临床检验诊断学教育部重点实验室供应室自行配制；CK抗体和波形蛋白抗体购自北京中山公司；质粒大抽试剂盒EndoFreePlasmidMaxiKit购自QIAGEN公司；定量PCR所用探针由上海Genecore合成；特优级血清购自Hyclon公司；EB1蛋白一抗购自Santacruz公司；免疫化学试剂盒购自北京中山生物试剂公司；OmniscriptReverse13Transcriptase试剂盒购自QIAGEN；PlatinumTaqpolymerase和T载体试剂盒购自TaK