aβ142诱导皮层神经元细胞凋亡的机制及通心络的干预作用

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1、Aβ142诱导皮层神经元细胞凋亡的机制及通心络的干预作用作者：张志慧周【摘要】目的探讨Aβ诱导皮层神经元凋亡的机制及通心络的干预作用。方法原代培养的小鼠皮层神经，经Aβ142处理后，MTT判断神经元存活率，Hoechst33342染色、流式细胞仪检测检测神经元凋亡，Western印迹法检测caspase凋亡蛋白的表达。结果神经元经Aβ142处理后，活细胞数减少，染色质浓缩、核碎裂，染色阳性神经元增多，细胞凋亡率上升，caspase3表达增强。通心络可明显改善上述变化。结论Aβ通过caspase3途径引起神经元凋亡从而导致神经元细胞死亡。通心络可抑制Aβ诱导的神经元凋

2、亡来保护神经元，从而起到治疗AD的作用。【关键词】Aβ淀粉样蛋；通心络；神经元凋亡；caspase3；凋亡相关基因蛋白【Abstract】ObjectiveTostudythemechanismofβamyloid(Aβ)onneuronapoptosisandtheeffectofTongxinluo.MethodsTheneuronsurvival,apoptosisofneuronsweredetectedbyHoechst33342staining,theexpressionpfcaspase3wasdeterminedbyWesternblot.Results

3、Thenumberofviablecells10wasdecreasedandthecondensationofchromatinandnuclearfragmentationwereshownafterAβ142treatment.Theexpressionofcaspase3waselevatedaftertreatedwithTongxinluo,alltheaboveindexeswereimproved.ConclusionsThemechanismofAβ142inducingneuronapoptosisisrelatedtoitsregulationon

4、theexpressionofapoptosisassociatedgeneandthecaspase3pathway.TongxinluocouldattenuatetheneurotoxicactionofAβ142andimproveneuronsurvival.　　【Keywords】βamyloidprotein;Tongxinluo;Neuronapoptosis;Caspase3;Apoptosisassociatedgene　　阿尔茨海默病(AD)归属于祖国医学中“呆症”和“健忘”等范畴。笔者认为AD病机关键在于肾元亏虚，痰瘀阻络，脑络不通，脑神失

5、用。其中肾元亏虚为发病之本，痰瘀阻络为本病发展和加重的重要病理因素。针对此病机，治疗应当益气、活血、通络。通心络由人参、水蛭、全蝎、土鳖虫、蜈蚣、蝉蜕、赤芍、冰片组成，具有益气活血、通络活络功效。方中人参补益元气，元气充足，络气畅通，气旺血行；虫类药活血、化瘀、通络；酸枣仁养血安神，冰片引药入络；诸药合用，达到气旺血行，脑络通畅，诸症自愈。在以往研究中发现，通心络临床治疗40例AD，总有效率达98.3%〔1〕，并可对抗Aβ2335的神经毒性作用〔2〕，具体机制不详。本研究采用Aβ11042诱导原代神经元凋亡建立AD细胞模型，观察通心络对Aβ142诱导的神经元凋亡的保护作

6、用，探索AD发病机制及其药物治疗方法。　　1材料与方法　　1.1材料　　通心络(石家庄以岭药业股份有限公司，批号：070901)，Aβ142(国家疾病预防与控制中心病毒学研究所合成馈赠)，CO2培养箱、DydatechMR4000型酶标仪、胎牛血清(Sigma公司)，培养基、胰蛋白酶(Trypsin，Sigma公司)，噻唑蓝(MTT，Sigma)，二甲基亚砜(DMSO，Sigma)，caspase3抗体（SantaCruz)等。　　1.2皮层原代神经元培养　　取怀孕14～16d昆明小鼠，75%乙醇浸泡消毒皮肤，取出胎鼠，无菌条件下断头取全脑，用眼科镊仔细剥除脑膜，切下双侧

7、大脑皮层，剪碎，移入消化液中（0.125%胰酶，用0.01mol/LPBS配制），置37℃水浴箱中消化20min，每隔5～10min取出摇匀。待组织块下沉后，用巴氏滴管吸出上清液，加入含10%FBS（胎牛血清）的DMEM完全培养基2～3ml，静置510min终止胰酶消化。弃上清，将组织悬浮于完全培养基中，用尖端经火焰钝化的巴氏滴管缓慢吹打20～30次，待组织团块基本消失，静置数分钟，将上层细胞悬液经100目不锈钢网过滤，残余组织再加入含10％FBS的DMEM／F12反复吹打，静置，悬液过滤。收集两次过滤