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1、碘显色法测定烟草中的淀粉含量张峻松 贾春晓 毛多斌 张文叶 李炎强 碘显色法测定木枣叶片中的淀粉含量淀粉是木枣中一类重要的碳水化合物,新鲜木枣通过调制,大部分淀粉经酶解反应降解为还原糖。由于淀粉的分离比较困难,长期以来淀粉被认为是较难测定的木枣组分之一。通常采用酸解或酶解[6~7]后测定还原糖的方法定量测定植物中的淀粉,但这两种方法都不易除净植物组织中的还原糖,而且还会有除淀粉外的高分子碳水化合物(如半纤维素)的水解,造成较大的干扰,使结果往往偏高[8]。淀粉与碘结合呈现蓝色的特性已广泛用于淀粉酶活性的测定[9],并
2、已用于食品中淀粉的定量分析[10],故借鉴食品中淀粉的分析方法,进行了碘显色法测定木枣中淀粉含量的研究,目的是建立简便、准确测定木枣淀粉的方法。1材料与方法1·1 材料与仪器(1)材料：延安大学生命科学学院组培实验室培养的木枣(2)仪器。720型分光光度计;LA-230S型电子天平(感量0·1mg)。(3)试剂。可溶性淀粉(标样)、碘和碘化钾(AR,上海华彭实业有限公司)、蒸馏水。1·2 实验方法1·2·1 溶液配制(1)碘-碘化钾溶液。称取2·6g碘和5·0g碘化钾,放入小烧杯中,加少许蒸馏水溶解,转移至1000m
3、L容量瓶中,用蒸馏水定容,摇匀。(2)淀粉储备液。称取0·5g可溶性淀粉,置于250mL烧杯中,加入100mL蒸馏水,搅拌下加热至沸,保持5min,冷却至室温后转入250mL容量瓶中,用蒸馏水定容、摇匀。1·2·2 烟样中淀粉的测定将各种烟样自然风干,先初步粉碎,再用研磨机粉碎,过40目筛,分别装入磨口棕色广口瓶中,待用。准确称取1·0g烟粉,放入50mL烧杯中,加入20mL蒸馏水,搅拌下加热至沸腾,保持5min,过滤。残渣用热蒸馏水洗涤(5mL×3,用碘-碘化钾溶液检测淀粉是否洗净),弃去残渣,合并滤液。滤液再加热
4、至沸腾,保持10min,冷却至室温,转入50mL容量瓶中,用蒸馏水定容、摇匀。取10mL烟样淀粉样品液,加入0·5mL碘-碘化钾溶液,以空白(10mL蒸馏水+0·5mL碘-碘化钾溶液,下同。)为参比,于600nm处测定样品液的吸光度,根据标准曲线计算烟样的淀粉含量。2 结果与讨论2·1 最大吸收波长的确定取0·8mg/mL淀粉标准溶液,加入碘-碘化钾溶液显色后,以空白为参比,测定不同波长下的吸光度。再以吸光度为纵坐标,吸收波长为横坐标绘制吸收曲线,由此测得其最大吸收波长为600nm。2·2 工作曲线准确吸取2mg/m
5、L淀粉标准溶液各0、2、4、6、8、10、12、15mL,分别置于25mL容量瓶中,用蒸馏水定容,摇匀。各取10mL按上述方法测定各淀粉标准溶液的吸光度。以吸光度对淀粉浓度作图,得淀粉工作曲线,其线性回归方程为:Y=0·0378X+0·0123,r=0·9997式中:Y—吸光度;X—淀粉浓度(mg/25mL);测定线性范围:0~1·25mg/mL。2·3 回收率采用标样加入法测定了淀粉的回收率。结果(表1)表明淀粉的平均回收率超过95%,因此,认为本法的测定结果较准确。2·4 重复性取6组同一烟叶样品,按上述条件进行
6、测定,结果表明:平均测定值为34·523mg,标准偏差为0·3352,变异系数为0·97%。表明方法的重复性较好,可以用于烟草中淀粉的定量分析。2·5 与酸解、酶解法的比较采用碘显色法、酸解、酶解法分别测定了云南B3F的淀粉含量。结果(表2)显示:(1)与传统的酸解、酶解法相比,碘显色法操作简便,省去了繁琐的前处理步骤,如:①酶解法需用有机溶剂洗去烟草表面的脂类物质,并需先测定酶的活性;②酸解、酶解法均须排除烟草中可溶性糖的干扰;③酸解、酶解法都需要于恒温下水解近2h。(2)碘显色法的测定结果虽然稍低于酸解、酶解法,
7、但差异不显著,相对也较准确,而酸解法和酶解法淀粉回收率大于100%的原因,可能是其他高分子碳水化合物(如半纤维素)水解造成的。因此,碘显色法更适于烟草中淀粉的快速定量分析。2·6 某些烤烟烟叶中的淀粉含量采用上述方法测定了18种不同地区、等级烤烟烟叶中的淀粉含量。结果(表3)表明:在所测定的烟叶中,①各地区的烟叶中淀粉含量有较大差异。其中以贵州烟叶的淀粉含量较低,以福建烟叶的淀粉含量较高;②从部位来看,淀粉含量按下部、上部、中部次序下降。这些差异可能是由于不同的烟叶所含的淀粉酶的量和其活性有关,这是一个值得深入研究的
8、问题。2·7 某些商品卷烟中的淀粉含量采用上述方法测定了国内外15种商品卷烟中的淀粉含量。结果(表4)表明:在所测定的卷烟中,①国内外混合型卷烟的淀粉含量基本一致;②国产烤烟型卷烟的淀粉含量较高,约是进口卷烟的1·6倍,这可能与其卷烟配方或原料的调制方法有关。3 结论建立了采用碘显色法测定烟叶淀粉含量的方法,并采用该方法测定了18种烤烟烟叶和1
