聚酰胺吸附铝离子显色法测定乌药叶中总黄酮的含量论文

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1、聚酰胺吸附铝离子显色法测定乌药叶中总黄酮的含量论文【摘要】目的采用聚酰胺吸附-铝离子显色法测定乌药叶中总黄酮的含量。方法经聚酰胺吸附后的样品，以芦丁为对照品，在420nm处测定吸收波长，绘制标准曲线，确定浓度。结果总黄酮在0.002～0.10mg·ml-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9995）。该法的平均加样回收率为97.5%,RSD为2.76%(n=5)。结论该方法简单、可靠。【关键词】乌药；总黄酮；聚酰胺；紫外分光光度法乌药Linderaaggregate（Sims）Kosterm.，樟科Lauraceae山胡椒属（Lindera）药

2、用植物。《中国药典》（2005版）规定其块根入药，具有顺气止痛、温肾散寒等功效，临床上被广泛用于治疗寒凝气滞所致脘腹疼痛.freell容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得浓度为1.0mg/ml的芦丁标准溶液。2.2供试品溶液的制备精密称取乌药叶粉末1.0g，置250ml三颈烧瓶中，用50%乙醇水浴加热（85℃）回流3次，每次溶剂100ml，回流时间1h，合并提取液，减压蒸馏除去溶剂，用甲醇溶解残渣并定容至50ml。然后，加入10ml水，用石油醚（60～90℃）萃取3次，每次用量为30ml。萃取液经减压蒸馏除去甲醇后，过聚酰胺柱，用95%乙醇洗

3、脱至无黄酮类物质为止。洗脱液减压浓缩，除去溶剂，残渣用甲醇溶解并定容至25ml，备用。2.3测定波长的确定精密移取1ml供试品溶液于10ml容量瓶中，加入4ml1%氯化铝甲醇溶液，然后用甲醇定容至10ml。同法，制得空白，在200～600nm进行扫描，记录紫外吸收光谱，见图1。从图1可以看出供试品溶液在225，275nm和420nm有吸收峰。由于420nm干扰较小，因此确定检测波长为420nm。2.4显色时间的确定精密移取1ml供试品溶液于10ml容量瓶中，加入4ml1%氯化铝甲醇溶液，然后用甲醇定容至10ml。每隔1min于420nm处测

4、定其吸光度。结果表明，供试品溶液显色15min后，吸光度几乎维持稳定。图1样品的紫外吸收光谱图（略）2.5聚酰胺用量的考察取适量聚酰胺粉末用95%乙醇煮沸30min后抽滤，如此重复3次。将最后抽干的粉末先置于室温下自然干燥30min，然后放入烘箱70℃下干燥1h。分别称取0.15，0.30，0.45，0.60，0.90g聚酰胺粉，以95%乙醇作流动相，装入层析柱中，加入黄酮提取液，以10～15倍95%乙醇洗脱，采用铝离子显色反应检测出口流出液。将流出液浓缩用甲醇定容至50ml，用紫外测定其吸光值变化。结果表明当聚酰胺用量超过0.45g之后，吸光

5、度变化不大。2.6标准曲线的绘制精密量取芦丁对照品溶液0.2，0.5，1.0，5.0，10ml置于10ml容量瓶中，甲醇定容。分别移取1ml溶液，分别置于10ml容量瓶中，加入4ml1%的氯化铝－甲醇溶液，用甲醇定容至刻度线，摇匀，放置15min。同法制得空白液，按分光光度法，在420nm波长处测吸光值。以吸光值为纵坐标，对照品溶液得浓度为横坐标，绘制曲线，进行线性回归。得回归方程为：A＝7.0592C－0.0066，相关系数r＝0.9995。结果表明，芦丁对照品在所试浓度0.002～0.10mg/ml内呈良好的线性关系。2.7重复性实验取同一

6、供试品溶液按上述方法连续检测6次，RSD＝0.24%，可见该方法重复性好，精密度高。2.8回收率实验采用加样回收率法，取供试品溶液0.10ml5份，分别添加已知含量的芦丁对照品溶液，测定总黄酮量，平均加样回收率为97.5%，RSD＝2.76%（n＝5）。2.9样品测定取供试品溶液于420nm处测定吸光值，计算供试品含量为2.10%。3结论黄酮类化合物为乌药叶抗菌、抗炎的主要有效成分，本研究建立总黄酮含量的分析方法，样品经提取、聚酰胺吸附、三氯化铝络合后，采用分光光度法，在420nm处，以芦丁为对照品测定其含量。本研究并进行了重复性、回收率实验，

7、证明方法简便可靠，为以后深入开展乌药叶资源的研究奠定了基础。【