hplc法测定乌药中异乌药内酯的含量

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1、HPLC法测定乌药中异乌药内酯的含量【关键词】乌药;异乌药内酯;高效液相色谱法　【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofisolinderalactoneinRadixlinderaebyRP-HPLC.MethodsThesampleasilC18(250mm×4.6mm，5μm)column.Themobilephasel/minandthedetectionandthecolumntemperatureethodissimple，accurate，reproduci

2、bleandcanofferrefereneesforthequalitycontrolofRadixlinderae.　　【Keyanceliquidchromatography　　乌药为樟科植物乌药Linderaaggregata(Sims)Kosterm.的干燥块根[1]，为常用的理气药。其现代研究多注重于生药的化学成分及药理作用的研究[2～4]，目前有关乌药含量测定的文献报道甚少[5，6]，而药材中异乌药内酯含量测定的方法目前尚无报道。为了更加有效地控制乌药药材质量，笔者首次建立了测定乌药中异乌药内酯的RP-HPLC含量测定方法，并

3、在此基础上对不同产地的乌药药材的含量进行了比较。　　1实验材料　　1.1仪器Agilent110高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司);分析天平DT-100(北京光学仪器厂);电热恒温鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂);不锈钢电热恒温水浴锅(北京市医疗设备厂);KQ-600型超声波清洗器(昆山市淀山湖检测仪器厂)。　　1.2药品与试剂异乌药内酯[上海顺勃生物工程技术(云南)公司，供含量测定用，纯度为99.9%，200711];甲醇(色谱纯，天津市密欧化学试剂有限公司，20080129);乙腈(色谱纯，天津市密欧化学试剂开发中心，20051012

4、);其余试剂均为分析纯，水为注射用水。乌药药材采于湖南省邵东以及安徽等地，经湖南中医药大学第一附属医院药检室鉴定为樟科植物乌药Linderaaggregata(Sims)Kosterm.的干燥块根。　　2异乌药内酯的含量测定　　2.1色谱条件色谱柱为KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-乙腈-水(35:25:40,v/v);检测波长:235nm;柱温：40℃;流速：1ml/min。　　2.2对照品的制备精密称定异乌药内酯对照品0.0019g,置25ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。(每1m

5、l中含异乌药内酯76μg)　　2.3样品制备取供试品，将其粉碎成细粉，取1g，精密称定，置50ml锥形瓶中，加甲醇50ml，称重，超声15min(功率250微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，备用。　　2.4标准曲线的制备精密吸取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、20.0μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值Y为纵坐标，以对照品的进样量X(mg)为横坐标进行线性回归，回归方程为：Y=384.6900X+4.9856，r2=0.9993。　　结果表明异乌药内酯的进样量在0.15～1.52μg的范围内与峰

6、面积呈良好的线性关系。　　2.5精密度实验分别精密吸取对照品溶液10μl,重复进样6次。其异乌药内酯峰面积的RSD为1.88%。　　2.6稳定性试验取当日配制的供试品溶液，于0、1、2、4、8、24h分别进样10μl，测定样品中异乌药内酯峰面积的RSD值为2.30%。试验结果表明，供试液在24h内稳定性良好。　　2.7重复性试验取同一批供试品，按2.3项下方法，分别制备供试液6份，每份进样10μl，测定峰面积并计算含量，异乌药内酯的平均含量为3.16mg/g，RSD值分别为1.89%。　　2.8加样回收率称取已知含量的供试品(含12.00%

7、的水分，异乌药内酯含量3.16mg/g)约0.5g6份，精密称定，分别置50ml锥形瓶中，精密加入一定量的对照品，加甲醇50ml，称重，按2.3项下操作，分别制得供试液，以上述色谱条件测定含量，平均回收率为98.81%，RSD为1.52%。结果见表1。表1异乌药内酯的加样回收率试验　　2.9样品测定取不同产地批次(分别于安徽，湖南邵东市售及自采)的供试品，按“2.3”项下的操作，进行测定，结果见表2(按干燥品计算),色谱图见图1。表2乌药供试品测定　　A乌药供试品(sampleofRadixLinderae);B异乌药内酯对照品(isoli

8、ndetalactone　　referencesubstances);1异乌药内酯(isolindetalactone)　　图1高效液相色谱图　　Fig1HPLCchromato