新生鼠肠损伤时肝脏黄嘌呤氧化酶的变化

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1、世界华人消化杂志 2004年 10月15日;12(10):2486-2487新生鼠肠损伤时肝脏黄嘌呤氧化酶的变化芦惠, 王丽杰, 中国医科大学附属第二医院儿科  辽宁省沈阳市  110004项目负责人: 芦惠,110004, 沈阳市和平区三好街36号, 中国医科大学附属第二医院儿科.  luhui66999@sina.com电话:024-23930619    传真:024-83955509收稿日期:2004-07-20    接受日期:2004-09-04摘要目的: 探讨新生鼠肠损伤时肝脏黄嘌呤氧化酶(XO)的变化.方法

2、: 新生大鼠随机分为对照组8只,实验组每一时相点各8只. 将Ecoli O55:B5脂多糖5mg/kg 注入新生鼠胃内,分别于灌胃后3,6,12,24,72h处死动物. 取部分肝组织固定,包埋,HE染色,光镜下观察其组织学改变. 其余肝组织用于测定XO活性.结果: 实验组6,12hXO活性明显高于对照组(分别为4719±793nkat/gvs3961±387nkat/g,4929±477nkat/gvs3961±387nkat/g,P<0.05);3,24,72hXO活性与对照组无显著差异(P<0.05). 内毒素治疗后随

3、着时间的进行逐渐出现中央静脉扩张,肝窦充血、炎性细胞浸润,肝细胞水肿,胞质疏松,空泡变性.6,12h可见大量肝细胞内出血,肝细胞坏死.24,72h肝细胞水肿渐消失,出血坏死不明显.结论: 新生鼠肠损伤时可致肝脏受累,且XO活性愈高,肝损伤愈重.芦惠, 王丽杰. 新生鼠肠损伤时肝脏黄嘌呤氧化酶的变化. 世界华人消化杂志  2004;12(10):2486-24870   引言坏死性小肠结肠炎(necrotizingenterocolitis,NEC)是新生儿期最常见的胃肠道疾病,可导致多器官功能衰竭[1]. 肝脏是人体重要的

4、免疫器官,在肠屏障功能受损时,作为第一道防线,一定程度上能抑制肠源性感染扩散,但其本身炎性细胞也可被激活,在倍增全身炎症反应的同时自身亦受到损伤[2].我们通过内毒素(lipopolysaccharide,LPS)建立新生鼠肠损伤模型,探讨肝脏黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XO)的变化及意义.1   材料和方法1.1 材料  健康1日龄Wistar新生大鼠,平均体质量6.3±0.9g,由中国医科大学第二临床学院动物部提供. 随机分为对照组8只,实验组每一时相点(3,6,12,24,72h)各8只. 将1.9

5、F硅胶管(B-D Inc,Sandy,UT,USA)经口插入胃内,Ecoli O55:B5脂多糖(LPS;SigmaChemicalCO.,St.Louis,Mo)5mg/kg用无菌生理盐水稀释至0.2mL注入胃内; 对照组则注入无菌生理盐水0.2mL[3]. 灌胃后各组均放回母鼠旁,继续哺乳,直至实验结束.动物处死后,分离肝脏.取肝组织于40g/L多聚甲醛中固定,常规脱水,包埋切片,行HE染色,光镜下观察其组织学变化. 其余肝组织于-80 °C超低温冰箱中保存,以备检测.1.2 方法  肝组织XO活性测定,按测定试剂盒要

6、求,应用紫外/可见分光光度计(法国500-P型),测定肝组织匀浆XO活性. 同时按考马斯亮兰蛋白测定试剂盒说明测定每一样本的蛋白浓度. 试剂盒均购自南京建成生物工程研究所.     统计学处理  经SPSS11.5ForWindows数据分析软件处理. 所有数据以mean±SD表示,组间比较采用配对t检验. 统计结果显著性以P<0.05表示.2   结果2.1 肝组织XO活性变化  实验组6,12h肝组织XO活性(4719±793nkat/g,4929±477nkat/g)均明显高于对照组(3961±387nkat/g,P

7、<0.05),高峰在12h;24h(4481±473nkat/g)XO活性下降,3(4268±455nkat/g),24,72h(3994±605nkat/g)肝组织XO活性与对照组无显著差异(P>0.05).2.2 肝组织形态学改变  对照组新生鼠肝小叶分界不清,肝板排列较成年大鼠差,胞质嗜碱性,门管区不清楚,但中央静脉清晰可见. 内毒素治疗后随着时间的进行,逐渐出现中央静脉扩张,肝窦充血、炎性细胞浸润,肝细胞水肿,胞质疏松,空泡变性.6,12h时可见大量肝细胞内出血,肝细胞坏死.24,72h时肝细胞水肿渐消失,出血坏死

8、不明显.3   讨论NEC多见于新生儿. 早产、缺氧/缺血、肠道喂养和细菌增生是导致此病的主要危险因素[1,3-5]. 临床统计,80%以上的NEC患儿是早产儿或低出生体质量儿,其发病率与胎龄呈负相关[6-8],原因是早产儿肠道免疫功能不成熟. 胃肠道免疫功能分为非特异性(先天性)和特异性两部分,前者包

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