从猕猴肝脏组织扩增黄嘌呤脱氢酶／氧化酶基因片段-论文.pdf

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1、2013年10月中国实验动物学报October，2013第21卷第5期ACTALABORATORIUMANIMALISSCIENTIASINICAVo1．2lNo．5从猕猴肝脏组织扩增黄嘌呤脱氢酶／氧化酶基因片段唐东红，罕圆圆，罗云，王城宽，黄英，毕正生，叶尤松(1．中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所，昆明650118；2．云南省中医学院，昆明650200)【摘要】RT-PCR扩增猕猴黄嘌呤脱氢酶／氧化酶(XDH／XO)基因片段，为进一步开展相关研究提供实验资料。方法提取猕猴新鲜肝脏组织总R

2、NA，用RT—PCR二步法进行XDH／XO基因片段扩增，对获得的目的片段进行序列测定，与GenBank上发表的人类(Homosapiens)、小鼠(Musmusculus)、家鼠(Rattusnorvegicus)、野猪(Susscrofa)等物种XDH／XO基因进行该序列同源性比对分析，DNAMAN软件预测该段核苷酸的氨基酸序列，Inter—ProScan及SWISS·MODEL工具进行XDH／XO的编码蛋白结构域及功能预测及三维结构构建。结果RT．PCR产物电泳检测得到了与设计大小相一致的目的条带

3、，序列测定共测到683个核苷酸，DNAMAN软件预测该段核苷酸的氨基酸序列包括了1个编码53个氨基酸的开放阅读框(ORF)，通过该软件包中Multiplealignment对目的基因片段的核苷酸序列与NCBI报道的人类、小鼠、家鼠、野猪XDH／XO基因mRNA互补的cDNA核苷酸序列同源性进行同源性比较分析，结果显示所扩增得到的目的片段与人类同源性最高，为95．6％，与小鼠、家鼠、野猪的同源性分别为85．2％、84．3％、86．1％，说明获得的基因片段是猕猴的XDH／XO基因片段，且该基因在物种间具有

4、较高的相似性。生物信息学预测该段XDH／XO编码蛋白含有醛氧化／脱氢酶的钼喋呤结合点结构域及黄嘌呤脱氢酶结构域。结论在体外成功扩增出猕猴XDH／XO基因片段，为进一步开展高尿酸血症致病机理研究，抗高尿酸血症新药研发奠定工作基础。【关键词】猕猴；XDH／XO基因片段；RT—PCR；肝脏组织；测序【中图分类号】Q95-33【文献标识码】A【文章编号】1005-4847(2013)05~057—07Doi：10．3969／i．issn．1005—4847．2013．05．012PCRamplificatio

5、nofthexanthinedehydrOgenase／0xidasegenefragmentfromthelivertissueofrhesusmonkeyTANGDong—hong，HANYuan—yuan，LUOYun，WANGChen-kuan，HUANGYing，BIZheng—sheng，YEYou．song(1．InstituteofMedicalBiology，ChineseAcademyofMedicalSciences／PekingUnionMedicalCollege，Kunmi

6、ng650118，China；2．YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine，Kunming650118)【Abstract】0bjectiveToamplifythexanthinedehydrogenase／0xidase(XDH／XO)genefragmentfromthelivertissueofrhesusmonkey．MethedsTotalRNAwasextractedfromthelivertissueforamplificationofX

7、DH／XOgenefrag—mentbytwo—stepRT—PCR．ThesequenceofamplifiednucleotideacidswasanalyzedbymultiplealignmentofDNAMANsoftwareaftergelelectroph0resisandsequencing．Thesequenceswerecomparedwiththatoftheotherspecies(Homosapi—ens，Musmusculus，Rattusnorvegicus，Susscr

8、ofa)searchedfromGenBank．SequencingresultsbyDNAMANsoftwarepre—dictedtheaminoacidsequence．Conserveddomainsandproteinthree—dimensionalstructureofXDH／XOwasanalyzedbyInterProScanandSWISS·MODEL．ResultsTheexpected683bpfragmentwasobtaine